W:Brother, natapos na ang reverse transcription, at sa wakas ang huling hakbang – fluorescent quantitative PCR!Uy, kapatid, ano ang real-time quantitative PCR?
M:PCR lagi mong alam, di ba?
W: Alam mo, ang PCR ay ang polymerase chain reaction, at ito ay isang teknolohiya na nagpapataas ng DNA!
M: Ito ay halos... Ito ay isang teknikal na paraan upang palakihin ang target na sequence sa higit sa isang milyong beses sa pamamagitan ng mga partikular na panimulang aklat, ngunit ito ay nagpapahiwatig lamang ng presensya o kawalan ng target na pagkakasunud-sunod, at hindi matukoy ang dami ng paunang template.Ang fluorescence quantitative PCR ay isang teknikal na pamamaraan na binuo upang malutas ang problemang ito.Karaniwang tinutukoy ito ng real time PCR at quantity PCR (qPCR).
W: Ang pagkakaiba sa ordinaryong PCR ay nasa fluorescence quantification?
M: Oo, iyon ay, sa yugto ng extension ng bawat PCR cycle, ang fluorescence signal intensity ay nakita, at ang paunang halaga ng template ay maaaring kalkulahin ayon sa pagbabago ng signal intensity.
W: Napakakomplikado sa pakiramdam!Kailangan ko bang kalkulahin ito nang mag-isa?
M: Ito ay nangangailangan sa iyo upang matuto nang dahan-dahan, ito ay pinakamahusay na magagawang upang maunawaan ang prinsipyo.Ngayon ay maaari ka munang tumuon sa halaga ng CT, na medyo intuitive na pang-eksperimentong data, at ang laki nito ay tumutugma sa laki ng paunang halaga ng template.Mayroon ding mga graph tulad ng amplification curves at melting curves.Sila ang may huling desisyon kung matagumpay o hindi ang iyong eksperimento.
W: Ay, kuya.Pagkatapos ay gagawin ko ang eksperimento sa qPCR!
M: Magbayad ng espesyal na pansin na huwag magdagdag ng mga template sa lugar ng reagent, kung hindi, ang iyong hindi nagamit na halo ay madaling mahawahan!
W: Nakuha ko!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Mas mataas na kahusayan, higit na pagtitiyak
Mataas na sensitivity, magandang compatibility