Plant Total RNA Isolation Kit Total RNA Purificaiton Kit para sa Plant Low in Polysaccharides at Polyphenols
Mga pagtutukoy
50 Preps, 200 Preps
Ginagamit ng kit ang spin column at formula na binuo ng Foregene, na mahusay na nakakakuha ng high-purity at mataas na kalidad na kabuuang RNA mula sa iba't ibang tissue ng halaman na may mababang polysaccharides at polyphenols na nilalaman.Para sa mga sample ng halaman na may mataas na polysaccharides o polyphenols na nilalaman, inirerekomendang gamitin ang Plant Total RNA Isolation Plus Kit upang makakuha ng mas mahusay na mga resulta ng pagkuha ng RNA.Ang kit ay nagbibigay ng DNA-Cleaning column na madaling mag-alis ng genomic DNA mula sa supernatant at tissue lysate.Ang column na RNA-only ay maaaring epektibong magbigkis sa RNA.Ang kit ay maaaring magproseso ng isang malaking bilang ng mga sample sa parehong oras.
Ang buong sistema ay hindi naglalaman ng RNase, kaya ang purified RNA ay hindi mapapasama.Maaaring tiyakin ng Buffer PRW1 at Buffer PRW2 na ang nakuhang RNA ay hindi kontaminado ng protina, DNA, mga ion, at mga organikong compound.
Mga bahagi ng kit
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-Free ddH2O, Hanay ng Paglilinis ng DNA |
| RNA-Only Column |
| Mga tagubilin |
Mga tampok at kalamangan
■ Operasyon sa temperatura ng silid (15-25 ℃) sa buong proseso, nang walang ice bath at low temperature centrifugation.
■ Kumpletong kit RNase-Free, hindi kailangang mag-alala tungkol sa pagkasira ng RNA.
■ Ang DNA-Cleaning Column ay partikular na nagbubuklod sa DNA, upang maalis ng kit ang genomic DNA contamination nang hindi nagdaragdag ng DNase.
■ Mataas na RNA yield: Ang RNA-only na Column at natatanging formula ay maaaring mahusay na maglinis ng RNA.
■ Mabilis na bilis: madaling patakbuhin at maaaring kumpletuhin sa loob ng 30 minuto.
■ Kaligtasan: walang kinakailangang organikong reagent.
■ Mataas na kalidad: Ang mga purified RNA fragment ay may mataas na kadalisayan, walang protina at iba pang mga dumi, at maaaring matugunan ang iba't ibang mga pang-eksperimentong aplikasyon sa ibaba ng agos.
Application ng kit
Ito ay angkop para sa pagkuha at paglilinis ng kabuuang RNA mula sa sariwa o frozen na mga sample ng tissue ng halaman (lalo na ang sariwang tissue ng dahon ng halaman) na may mababang polysaccharide at polyphenol na nilalaman.
Daloy ng trabaho
Diagram
Ang Plant Total RNA Isolation Kit Plus ay nagproseso ng 50mg ng sariwang dahon ng polysaccharides at polyphenols, at 5% na purified RNA ay nasubok sa pamamagitan ng electrophoresis.
1: Saging
2: Ginkgo
3: Cotton
4: Pomegranate
Imbakan at buhay ng istante
Ang kit ay maaaring itago ng 12 buwan sa temperatura ng silid (15–25 ℃) sa tuyong kapaligiran, at 2–8 ℃ para sa mas mahabang panahon (24 na buwan).
Ang buffer PSL1 ay maaaring maimbak sa 4 ℃ sa loob ng 1 buwan pagkatapos magdagdag ng 2-hydroxy-1-ethanethiol(opsyonal).
Gabay sa Pagsusuri ng Suliranin
Ang sumusunod na pagsusuri ng mga problemang maaaring makaharap moKabuuan ng halamanRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Ang spin column ay barado
Ang pagbara ng spin column ay magiging sanhi ng pagbaba ng RNA yield o kahit na hindi ma-purify para makakuha ng RNA, at magiging mababa ang kalidad ng nakuhang RNA.
Pagsusuri ng Karaniwang Dahilan:
1. Ang sample ay hindi ganap na nasira.
Maaaring harangan ng hindi kumpletong sample fragmentation ang DNA-Cleaning Column, na maaari ding makaapekto sa RNA yield at kalidad.Inirerekomenda namin na kapag nagsasagawa ng sample fragmentation, mabilis na gumiling sa sapat na dami ng likidong nitrogen upang masira ang mga tissue gaya ng mga cell wall at cell membrane ng mga sample hangga't maaari.Para sa mga sample ng halaman ng polyphenol polysaccharides, inirerekomenda namin na gumamit ka ng Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. I-aspirate ang DNA-Cleaning Column na nakahiwalay na supernatant, i-aspirate ang posibleng cell debris pellet.
Ang aspirated cell debris pellet ay maaaring makabara sa RNA-only Column sa panahon ng RNA adsorption procedure (tingnan ang hakbang 5 ng procedure, step 6 ng polysaccharide polyphenol procedure).Inirerekomenda namin na ang pag-iingat ay dapat gawin kapag hinihigaan ang supernatant na ito upang maiwasan ang pag-aspirar ng mga cell debris.
3. Masyadong malaki ang paunang halaga ng sample.
Ang labis na paggamit ng sample ay magreresulta sa hindi kumpletong pagkapira-piraso ng sample o hindi kumpletong lysis ng mga cell ng Buffer PRL1 o Buffer PSL1, na magreresulta sa isang baradong column ng purification para sa mga pagpapatakbo ng purification.Ang Plant Total RNA Isolation Kit ay may paunang maximum na 50 mg bawat solong purification ng isang pinaandar na sample.Para sa mga sample ng halaman ng polyphenol polysaccharides, inirerekomenda namin na subukan mo ang Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. Masyadong mababa ang temperatura ng centrifuge.
Buong RNA isolation at purification maliban sa liquid nitrogen disruption ng sample tissue, lahat ng hakbang ay ginagawa sa room temperature (20-25 °C).Ang ilang mga low-temperature centrifuges ay may temperaturang mas mababa sa 20 °C, na maaaring magdulot ng mga pagbara sa DNA-Cleaning Column at/o RNA-only Column.Kung mangyari ito, itakda ang centrifuge temperature sa 20-25 °C at painitin muna ang lysis mixture at/o ang pagdaragdag ng ethanol separation supernatant sa 37 °C.
Walang RNA extracted o RNA yield ay mababa
Karaniwang maraming salik ang nakakaapekto sa kahusayan sa pagbawi, tulad ng: sample na nilalaman ng RNA, paraan ng pagpapatakbo, dami ng elution, atbp.
Pagsusuri ng mga karaniwang sanhi tulad ng nasa ibaba:
1. Isang ice bath o mababang temperatura (4°C) centrifugation ang isinagawa sa panahon ng operasyon.
Mungkahi: Magpatakbo sa temperatura ng silid (15-25°C) sa buong proseso, huwag gumawa ng ice bath at low temperature centrifugation.
2.Ang RNA ay nasira dahil sa hindi wastong pag-iingat ng sample o pangmatagalang preserbasyon ng sample.
Rekomendasyon: Ang mga bagong nakolektang sample ay dapat na mabilis na i-freeze sa liquid nitrogen, at pagkatapos ay iimbak sa -80°C sa mahabang panahon, iwasan ang paulit-ulit na pagyeyelo at pagtunaw ng mga sample;o agad na ibabad ang mga sample sa RNA stabilizer RNAlater solution (mga sample ng hayop).
3.Ang hindi sapat na sample fragmentation at lysis ay humantong sa pagbara ng column ng purification.
Mungkahi: Kapag ginigiling ang tissue, pakitiyak na ang tissue ay sapat na nagiling, at mabilis na ilipat ito sa pre-prepared na Buffer PSL1 (kumpirmahin na ang tamang proporsyon ng β-ME ay naidagdag, tingnan ang hakbang 1 ng pamamaraan).
4.Maling naidagdag ang eluent.
Mungkahi: Siguraduhin na ang RNase-Free ddH2Ang O ay tinutulo sa gitna ng purification column membrane.
5. Ang tamang dami ng absolute ethanol ay hindi naidagdag sa Buffer PSL2 o Buffer PRW2.
Mungkahi: Mangyaring sundin ang mga tagubilin, idagdag ang tamang dami ng absolute ethanol sa Buffer PSL2 at Buffer PRW2 at haluing mabuti bago gamitin ang kit.
6. Hindi naaangkop ang dami ng sample ng tissue.
Mungkahi: Gumamit ng 50 mg ng tissue bawat 500 μl ng Buffer PSL1.Ang paggamit ng masyadong maraming tissue ay mababawasan ang dami ng RNA na na-extract at ang kadalisayan ng nagreresultang RNA ay mababawasan din.Lubos naming inirerekumenda na ang paunang sample na dosis ay hindi dapat lumampas sa 50 mg bawat operasyon ng pagkuha ng RNA.
7. Hindi angkop na elution volume o hindi kumpletong elution.
Mungkahi: Ang eluent volume ng purification column ay 50-200 μl;kung ang epekto ng elution ay hindi kasiya-siya, inirerekomenda na pahabain ang oras sa temperatura ng silid pagkatapos magdagdag ng preheated na RNase-Free ddH2O, tulad ng 5-10min.
8. Ang purification column ay may ethanol residue pagkatapos hugasan gamit ang Buffer PRW2.
Mungkahi: Kung ang walang laman na tubo ay na-centrifuge sa loob ng 1 min at may natitira pang ethanol pagkatapos ng paghuhugas sa Buffer PRW2, maaari mong dagdagan ang oras ng sentripugasyon ng walang laman na tube sa 2 min, o ilagay ang purification column sa temperatura ng silid sa loob ng 5 min upang ganap na maalis ang natitirang ethanol.
9. Ang kit ay ginamit nang hindi tama.
Mungkahi: Para sa mga sample ng halaman ng polyphenolic polysaccharides, ang paggamit ng mga karaniwang kit gaya ng Plant Total RNA Isolation Kit ay maaaring hindi makakuha ng mga ideal na sample ng RNA.Inirerekomenda namin sa iyo na gumamit ng Plant Total RNA IsolationKit Plus, na espesyal na idinisenyo para sa mga sample ng halaman na polyphenolic polysaccharide.Isang kit na espesyal na binuo para sa pagkuha ng RNA mula sa polyphenol at polysaccharide na mga sample ng halaman.
Ang halaga ng OD260/OD280 ay mababa
RNA elution na may ddH2O at ginagamit para sa mga pagbabasa ng spectrophotometer ay nagreresulta sa mababang mga halaga ng OD260/OD280.Inirerekomenda namin ang paggamit ng 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (sa halip na RNase-Free ddH2O upang i-elute ang RNA) upang makakuha ng medyo wastong mga halaga ng OD260/OD280, tingnan ang “RNA Concentration and Purification Assays” sa pahina 19.
Ang purified RNA ay nasira
Ang kalidad ng purified RNA ay nauugnay sa mga salik tulad ng pagpreserba ng sample, kontaminasyon ng RNase, at pagmamanipula.
Pagsusuri ng mga karaniwang sanhi:
1. Ang mga sample ng tissue ay hindi naimbak sa oras pagkatapos ng koleksyon.
Rekomendasyon: Kung ang mga sample ng tissue ay hindi ginamit sa oras pagkatapos ng koleksyon, mangyaring itago ang mga ito sa likidong nitrogen sa mababang temperatura kaagad o ilipat ang mga ito sa -80°C para sa pangmatagalang imbakan pagkatapos ng mabilis na pagyeyelo sa likidong nitrogen, o agad na isawsaw ang mga sample sa RNA stabilizer na RNAlater solution (mga sample ng hayop ).Para sa pagkuha ng RNA, subukang gumamit ng mga bagong nakolektang sample ng tissue.
2. Paulit-ulit na pagyeyelo at pagtunaw ng mga sample ng tissue.
Mungkahi: Kapag nag-iimbak ng mga sample ng tissue, pinakamahusay na putulin ang mga ito sa maliliit na piraso para sa pangangalaga, at kumuha ng isang bahagi ng mga ito kapag ginagamit ang mga ito upang maiwasan ang pagkasira ng RNA na dulot ng paulit-ulit na pagyeyelo at pagtunaw ng mga sample.
3. Ang RNase ay ipinakilala sa silid ng pagpapatakbo o hindi suot na disposable gloves, mask, atbp.
Mungkahi: Ang mga eksperimento sa pagkuha ng RNA ay pinakamahusay na ginagampanan sa magkahiwalay na mga operasyon ng RNA, at ang talahanayan ng laboratoryo ay dapat na linisin bago ang eksperimento, at ang mga disposable na guwantes at maskara ay dapat na magsuot sa panahon ng eksperimento upang maiwasan ang pagkasira ng RNA na dulot ng pagpapakilala ng RNase sa pinakamalaking lawak.
4. Ang reagent ay kontaminado ng RNase habang ginagamit.
Mungkahi: Palitan ng bagong serye ng kabuuang RNA extraction kit ng halaman para sa mga kaugnay na eksperimento.
5. Ang mga centrifuge tube at mga tip sa pipette na ginagamit para sa pagmamanipula ng RNA ay kontaminado ng RNase.
Mungkahi: Siguraduhin na ang mga centrifuge tubes, pipette tip, pipettes, atbp. na ginagamit sa RNA extraction ay RNase-Free lahat.
Mga Manwal ng Pagtuturo:
