Panimula:

Ang RNA, siyentipikong pangalan na ribonucleic acid, ang pagdadaglat nito ay mula sa RiboNucleic Acid, ay isang uri ng nucleic acid na nabuo sa pamamagitan ng pagkonekta ng hindi bababa sa dose-dosenang ribonucleotides sa pamamagitan ng mga phosphodiester bond.

Ang saligan ng paggalugad ng RNA ay upang kunin ang Kabuuang RNA na walang polusyon, at ang pangunahing prinsipyo ng pagkuha ng RNA ay maaaring halos maibuod tulad ng sumusunod:

1. Guluhin muna ang mga selula

2. Pagkatapos ay alisin ang mga macromolecular impurities (proteins, lipids, DNA, atbp.)

3. Sa wakas, ang RNA ay namuo habang inaalis ang mga asing-gamot at mga organikong solvent, at higit pang nililinis ang RNA

Nakaraan at kasalukuyan ng paraan ng pagkuha

Ang unang henerasyon ng paraan ng RNA extraction ay ang TRIzol precipitation method (reagents na ginamit ay kinabibilangan ng guanidine isothiocyanate, phenol, chloroform, atbp.) na imbento ng isang lolo na nagngangalang Piotr Chomczynski at lola Nicoletta Sacchi, dahil ang imbensyon na ito ay nagbibigay-daan sa RNA extraction Mabilis at madali, mula noon ay nagsimula ang pagtaas ng RNA ng pananaliksik.

Nang maglaon, ibinenta ni Lolo ang patent na ito sa Invitrogen, at itinaguyod ng Invitrogen ang pamamaraang ito sa mundo at naging malawakang ginagamit na paraan.

Nang maglaon, nakuha ng Thermo ang Invitrogen!

Kinatawan ng produkto: Invitrogen's TRIzol reagent

Gayunpaman, ang pamamaraan ng pag-ulan ng TRIzol ay nangangailangan ng maramihang pag-ulan at pagkuha ng RNA, at ang mga reagents na ginamit ay nakakalason at tumatagal ng mahabang panahon upang gumana.

Samakatuwid, nabuo ang pangalawang henerasyong paraan ng pagdalisay ng column-enzyme, gamit ang silica gel membrane bilang isang tiyak na materyal na adsorption ng nucleic acid upang mapakinabangan ang pagbawi ng RNA sa sample habang inaalis ang iba pang mga impurities.

Pinapasimple ng pangalawang henerasyong pamamaraan ang operasyon batay sa matatag na pagganap, binabawasan ang panganib na kadahilanan, at pinapabuti ang kahusayan ng pagkuha ng RNA.

Mga kinatawan ng produkto: QIAGEN RNeasy at karamihan sa mga domestic na produkto

Gayunpaman, pareho ang una at ikalawang henerasyon na mga pamamaraan ay nangangailangan ng paggamit ng DNase upang alisin ang kontaminasyon ng DNA, na nagdudulot ng ilang abala sa kasunod na mga eksperimento sa ibaba ng agos.Babawasan ng natitirang DNase ang kahusayan ng reverse transcription at babawasan ang first-strand cDNA synthesis, at sa gayon ay makakaapekto sa katumpakan ng mga resulta.

Samakatuwid, ang paraan ng pagkuha ng ikatlong henerasyon ay na-optimize batay sa pangalawang henerasyon.Ang eksperimento ay hindi kailangang magdagdag ng anumang mga enzyme, at ang RNA ay madaling makuha gamit lamang ang dalawang column.

Column 1: DNA-Cleaning Column para i-clear ang DNA

Column 2: RNA-only Column na partikular na nag-adsorb at nagre-recover ng RNA

Ang ganitong simpleng operasyon ay hindi lamang nakakatipid ng oras, ngunit pinapadali din ang pagpapatakbo ng mga eksperimento sa ibaba ng agos!

Mga kinatawan ng produkto: QIAGEN RNeasy Plus atForegeneMga produkto ng serye ng paglilinis ng RNA

（RNeasy Plus）

（Kay ForegenePlant Total RNA Isolation Kit）

Sabihin mo nang tahimik!Ang RNA kit ng Foregene ay nagpapakita rin ng napakadaling gamitin na RNase Eraser, na maaaring ganap na mag-alis ng 400μg ng RNase sa solid surface sa loob ng 1 minuto, nang hindi nagdaragdag ng anumang nakakalason na sangkap sa katawan ng tao!

Pic1: Tsart ng paghahambing ng proseso ng pagpapatakbo

Maaaring kumpletuhin ng mga produkto ng Foregene ang RNA extraction sa dalawang kanta lang, huwag pagselosin ang iba sa pag-unlad ng iyong eksperimento!

Pic2:Emga eksperimentong resulta tsart ng paghahambing

Ang unang henerasyon (1: TRIzol)

Ang ikalawang henerasyon (2: RNeasy ng QIAGEN)

Ang ikatlong henerasyon (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Pic3: qPCR graph (amplification curve graph)

Ang unang henerasyon (berde ay nangangahulugang TRIzol -, pula ay TRIzol +)

Ang ikalawang henerasyon (ang asul na langit ay nangangahulugang QIAGEN RNeasy-, ang pula ay QIAGEN RNeasy +)

Ang ikatlong henerasyon (ang asul ay nangangahulugang QIAGEN RNeasy plus, berde ay nangangahulugang Foregene)

(Tandaan: Ang qPCR graph “-” ay nagpapahiwatig na ang DNase ay hindi naidagdag at ang DNA contamination ay hindi naalis. Samakatuwid, ang CT ay mas mataas at ang resulta ay hindi tumpak; “+” ay nagpapahiwatig na ang DNase ay naidagdag at ang DNA contamination ay inalis, ang resulta ay tumpak)

Ang bawat teknikal na pag-upgrade ay nangangahulugan na ang pagpapatakbo ng eksperimento ay umuunlad sa isang mas simple at mas madaling gamitin na direksyon.

Nilalayon ng Foregene na tulungan ang mas maraming siyentipikong mananaliksik na makatipid ng oras at gastos sa pang-eksperimentong, makakuha ng mataas na kalidad na mga resultang pang-eksperimento, at magkatuwang na lumikha ng mas mahahalagang tagumpay sa pananaliksik sa siyensya.