Mga May-akda: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Yunit: Jiaozhou Hospital, Dongfang Hospital Affiliated to Tongji University

Sa kasalukuyan, ang pangunahing uri ng sample para sa pagtuklas ng nucleic acid ng respiratory pathogen ay throat swab.Maraming uri ng karaniwang ginagamit na solusyon sa pag-iingat ng sample, lahat ng ito ay kailangang palamigin o i-freeze para sa transportasyon at imbakan;Mahirap kontrolin ang buong proseso ng mababang temperatura sa panahon ng proseso ng koleksyon at transportasyon, at mahirap tiyakin ang kontrol sa kalidad bago ang pagsubok ng sample^[1-2].

Ang RNase (RNase) ay isang endonuclease na nag-hydrolyze ng RNA, pangunahin na pinuputol ang mga phosphodiester bond sa pagitan ng mga nucleotide.Ang molekula ng RNase ay napaka-stable, may mga disulfide bond sa istraktura, at ang aktibidad nito ay hindi nangangailangan ng pagkakaroon ng mga divalent cations, kaya ang RNase ay hindi madaling ma-denatured, at ito ay madaling i-renature kahit na pagkatapos ng mataas na temperatura o ang paggamit ng mga denaturants.Ang mga RNases ay nahahati sa mga endogenous at exogenous.Ang mga endogenous RNases ay maaaring ilabas sa parehong oras kapag ang mga cell ay ruptured.Samakatuwid, ang pag-alis ng papel ng mga endogenous RNases ay isang napaka-kritikal na hakbang sa proseso ng pagkuha ng RNA.Ang mga exogenous RNases ay malawak na ipinamamahagi.Umiiral ang mga RNase sa hangin, balat ng tao, buhok at laway, na mahalagang dahilan ng madaling pagkasira ng RNA^[3].

Query sa data

Ang CANS-CL02-A009 “Application ng Medical Laboratory Quality and Competency Accreditation Guidelines in the Field of Molecular Diagnosis” sa mga teknikal na kinakailangan ay nagmumungkahi na ang naaangkop na mga pamantayan ng kalidad ng tubig ay dapat buuin ayon sa aplikasyon;Mga disposable airtight container:

RNase/Pag-uuri

(1) RNase A

Ang Ribonuclease A (RNase A), na nagmula sa bovine pancreas, ay isang endoribonuclease na maaaring partikular na umatake sa 3′ dulo ng pyrimidine residues sa RNA, pagputol ng cytosine o uracil na nabuo ng mga katabing nucleotides.Phosphodiester bond, ang huling produkto ng reaksyon ay isang 3′ pyrimidine nucleotide at isang oligonucleotide na may 3′ pyrimidine nucleotide sa dulo.

(2) RNase T1

Ang Ribonuclease T1 (RNase T1) ay nagmula sa Aspergillus orjzae, partikular itong kumikilos sa 3′-terminal phosphate ng guanine, at ang cleavage site ay nasa pagitan ng 3′ phosphate ng guanine at ang 5′ hydroxyl ng mga katabing nucleotides.Ang huling produkto ng reaksyon ay 3′guanylic acid at oligonucleotide fragment na may 3′guanylic acid sa dulo.

(3) RNase H

Ang Ribonuclease H (RNase H) ay unang natuklasan mula sa calf thymus tissue, at ang encoding gene nito ay na-clone sa Escherichia coli.Maaari itong partikular na pababain ang DNA: RNA strands sa RNA hybrid duplexes, na nagreresulta sa oligonucleotides at mononucleotides na may 3′-OH at 5′-monophosphate na mga dulo, hindi nito mapapababa ang single- o double-stranded na DNA o RNA.

RNase

Pag-andar at paggamit

Maaaring gawing catalyze ng Ribonuclease ang pagkasira ng ribonucleic acid (RNA) at maaaring i-synthesize nang artipisyal.Ang panggamot na pamahid ay ginagamit sa pangkasalukuyan upang gamutin ang trauma at pananakit ng kasukasuan.Ayon sa mga ulat, maaaring baguhin ng ribonuclease ang metabolismo ng host cell, pagbawalan ang synthesis ng virus, pagbawalan ang paglaganap ng influenza virus sa vitro, at pagbawalan ang pagbuo ng vaccinia at herpes virus sa mga embryo ng manok.Klinikal na paggamit ng ribonuclease araw-araw intramuscular iniksyon ng 180 mg, kapaki-pakinabang sa paggamot ng epidemya encephalitis, ribonuclease ay maaaring catalyze ang marawal na kalagayan ng ribonucleic acid (RNA), at maaari na ngayong artipisyal na synthesize.Ang panggamot na pamahid ay ginagamit sa pangkasalukuyan upang gamutin ang trauma at pananakit ng kasukasuan.Ayon sa mga ulat, maaaring baguhin ng ribonuclease ang metabolismo ng host cell, pagbawalan ang synthesis ng virus, pagbawalan ang paglaganap ng influenza virus sa vitro, at pagbawalan ang pagbuo ng vaccinia at herpes virus sa mga embryo ng manok.Ang klinikal na paggamit ng ribonuclease araw-araw na intramuscular injection na 180 mg ay kapaki-pakinabang para sa paggamot ng epidemic encephalitis.

RNase

Kahulugan ng Inhibitor

Kahulugan ng unit ng RNase inhibitor: Ang halaga ng enzyme na kinakailangan upang pigilan ang 50% ng aktibidad ng 5ng RNase A ay isang yunit.

Paano Gumagana ang RNase Inhibitors

Guanidine isothiocyanate:

Ang Guanidine isothiocyanate ay isang organic compound na may molecular formula C2H6N4S.Pangunahing ginagamit sa biological medicine, chemical reagents, atbp. Guanidine isothiocyanate ay isang protina lysing agent, at madalas itong ginagamit bilang pangunahing bahagi ng lysis solution sa molecular diagnostic reagents.Maaari nitong i-lyse ang tissue, sirain ang istraktura ng cell at ihiwalay ang nucleic acid mula sa nucleoprotein, at may malakas na denaturation sa RNase.Ito ang pinaka-epektibong RNase inhibitor sa kasalukuyan.

Ang TRIzol ay isang nobelang kabuuang RNA extraction reagent na maaaring direktang kunin ang kabuuang RNA mula sa mga cell o tissue.Naglalaman ito ng mga sangkap tulad ng phenol at guanidine isothiocyanate, na maaaring mabilis na makagambala sa mga cell at makapigil sa mga nucleases na inilabas ng mga cell.

(Gayunpaman, ang guanidine isothiocyanate ay mapanganib para sa kalusugan ng mga mananaliksik sa lab.)

RNasin:

Acid glycoprotein na nakuha mula sa atay ng daga o blastoderm ng tao.Ang Rnasin ay isang non-competitive na inhibitor ng RNase, na maaaring magbigkis sa iba't ibang RNases upang hindi aktibo ang mga ito.

(Higit pang mga detalye:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

High temperatura:

Ang mataas na temperatura ay isa ring karaniwang paraan ng denaturation ng protina.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

Ang DEPC ay isang malakas ngunit hindi kumpletong RNase inhibitor, na maaaring humadlang sa aktibidad ng RNase sa pamamagitan ng pagsasama sa amino acid imidazole ring ng RNase active group sa denature na mga protina.

Vanadyl ribonucleoside complex:

Isang kumplikadong nabuo sa pamamagitan ng vanadium oxide ions at nucleosides, na nagbubuklod sa RNase sa anyo ng mga transition substance, na maaaring halos ganap na humadlang sa aktibidad ng RNase

iba pa:

Ang SDS, urea, diatomaceous earth, atbp. ay mayroon ding tiyak na epekto sa pagpigil sa RNase.

Mga Review ng Dalubhasa

Li Yujie Chief Technician

Direktor ng Laboratory Department, Jiaozhou Hospital, Dongfang Hospital na Kaakibat sa Tongji University

Upang maiwasan ang biodegradation ng exogenous RNase, ang mga maskara, guwantes at sumbrero ay dapat na magsuot at palitan ng madalas sa panahon ng proseso ng pagkuha ng RNA.Ang lahat ng mga babasagin ay dapat na lutuin sa isang drying oven sa 200°C nang higit sa 2 oras.Ang mga materyales na ginagamit para sa pagbe-bake, tulad ng plastic, ay kailangang tratuhin ng tubig ng DEPC, at pagkatapos ay hugasan ng distilled water.Ang mga reagents o device na ginagamit para sa pagkuha, pag-iingat at pagkilala ng RNA ay dapat na nakatuon sa RNA, at isang independiyenteng lugar ng pagpapatakbo ng RNA ay dapat na i-set up.

mga sanggunian:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Ang mga bakterya at mga virus sa nasopharynx kaagad bago ang pagsisimula ng mga talamak na impeksyon sa mas mababang paghinga sa mga batang Katutubong Australian[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Sangay ng Pagkontrol sa Impeksyon sa Ospital ng Chinese Preventive Medicine Association.Mga alituntunin para sa koleksyon at inspeksyon ng mga klinikal na microbial specimens [J].Chinese Journal of Hospital Infection, 2018(20):3192-3200.

[3] “Clinical Test Ten Thousand Why Molecular Biology Test Volume”