Gumagamit ka pa ba ng Trizol para i-extract ang RNA?
Sus, huwag mo akong alalahanin sa kalusugan mo!
Malapit nang ma-marginalize si Trizol, don't tell me nasa dilim ka pa?

Ang pangunahing bahagi ng Trizol reagent ay phenol, at ang mga organikong reagents tulad ng chloroform ay idinagdag din sa eksperimentong operasyon.Ang pangmatagalang pagkakalantad ay magdudulot ng pinsala sa iyong kalusugan, lalo na ang direktang pagkakadikit sa balat ay maaaring magdulot ng matinding pagkasunog ng kemikal at permanenteng peklat.

Sa ilalim ng normal na mga pangyayari, mababawasan lamang ng mga kasosyo sa laboratoryo ang mga panganib sa pamamagitan ng ganap na pag-armas sa kanilang sarili (pagsuot ng mga lab coat, guwantes at maskara).

At ang payo ko sa iyo ay: mangyaring palitan ang Trizol nang direkta upang maiwasan ang pinsala mula sa pinagmulan.

1. Ang unang henerasyong produkto ng RNA extraction
Lumabas noong 1987 (Trizol reagents)

kalamangan:
Mas kumpletong pagkuha

Mga disadvantages:
Ang mga nakakalason na reagents tulad ng guanidine isothiocyanate-phenol-chloroform ay kinakailangan;
Masalimuot na operasyon;
Kailangang gumamit ng DNase para alisin ang kontaminasyon ng DNA

2. Ang pangalawang henerasyong produkto ng RNA extraction
Lumabas noong 1994 (QIAGEN RNeasy at karamihan sa mga domestic na produkto)

kalamangan:
Ang paraan ng sentripugal ng haligi ay pinagtibay, na madaling patakbuhin;

Disadvantage:
Kailangang mag-centrifuge upang maalis ang mga labi ng tissue
Kailangang gumamit ng DNase para alisin ang kontaminasyon ng DNA

3.Ang ikatlong henerasyong produkto ng RNA extraction
Papalabas noong 2005 (QIAGEN RNeasy Plus at ForegeneRNA purification series na mga produkto)

kalamangan:
Direktang gamitin ang column ng pag-alis ng DNA upang tanggalin ang mga labi ng DNA at tissue sa parehong oras, makatipid ng oras at pagsisikap;
Ligtas at maginhawa, hindi na kailangang magdagdag ng column ng filter at DNase para madaling maalis ang mga impurities at maiwasan ang kontaminasyon ng DNA

Tingnan natin ang mga pagkakaiba sa pagpapatakbo sa pagitan ng unang henerasyong produkto (Trizol), pangalawang henerasyong produkto (RNeasy) at ikatlong henerasyong produkto (Foregene) ng RNA extraction:

Ang operasyon sa figure ay malinaw: ang ikatlong henerasyong produkto ay may malinaw na mga pakinabang

Tatlong salita lamang upang ilarawan: madali!Mabilis!Kaligtasan

Ang PK chart ng mga pang-eksperimentong resultapara saang unang henerasyon, pangalawang henerasyon at ikatlong henerasyon na mga produkto ng RNA extraction:

1. Electrophoretogram

Ang unang henerasyon (1: Trizol)
Ang ikalawang henerasyon (2:QIAGEN RNeasy)
Ang ikatlong henerasyon (3: QIAGEN RNeasy plus, 4: Foregene)

Anong uri ng produkto ang maganda, malalaman mo sa paghahambing
Na-extract ang RNA gamit ang Foregene kit
Hindi lamang mataas na konsentrasyon kundi pati na rin ang mahusay na integridad

2.qPCR graph (amplification curve graph)

Ang unang henerasyon (Trizol)

Ang ikalawang henerasyon (sky blueibig sabihinQIAGEN RNeasy-, pulaibig sabihinQIAGEN RNeasy +)

Ang ikatlong henerasyon (asul ay nangangahulugang Foregene, berde ay QIAGEN RNeasy plus)

(Tandaan: Ang pangalawang henerasyong QIAGEN RNeasy ng qPCR graph ay nangangahulugan na ang kit ay hindi nagdaragdag ng DNase at hindi nag-aalis ng kontaminasyon ng DNA. Samakatuwid, ang CT ay mas mataas at ang resulta ay hindi tumpak; QIAGEN RNeasy + ay nangangahulugan na ang DNase ay naidagdag at ang DNA contamination ay inalis, at ang resulta ay tumpak)

Maging ito ay isang electrophoregram o isang quantitative PCR amplification curve graph, ang kalidad ng mga produkto ng Foregene ay hindi mas mababa sa mga dayuhang imported na produkto.