Ang RNase ay isang sensitibong salita na hindi gustong marinig ng maraming estudyante na madalas nagsasagawa ng mga eksperimento sa pagkuha ng RNA.Ganap na armado, ang RNA na sa wakas ay nakuha na may mataas na nakakalason na reagents na phenol at chloroform ay nasira.Hindi ako nagkasundo!!!Ngayon, tingnan natin ang pinagmulan ng sikat na Rnase.

Ang Ribonuclease (RNase), o RNase, ay isang nuclease na maaaring mag-hydrolyze ng RNA sa maliliit na molekula.Ang RNase, bilang isang maliit na molekula ng protina, ay hindi pangkaraniwang matatag .Ang tradisyonal na mataas na temperatura at mataas na presyon ng steam sterilization at mga inhibitor ng protina ay hindi maaaring ganap na i-disable ito.Ang katatagan ng RNase ay pangunahing nagmumula sa mga disulfide bond sa istraktura.Halimbawa, ang karaniwang ginagamit na RNase ng bovine pancreas ay may 124 amino acid lamang, ngunit naglalaman ng 4 na disulfide bond.Ang sulfur bond at disulfide bond ay nagbibigay ng RNase ng mahusay na thermal stability.Bilang karagdagan, ang rnase ay may medyo maliit na molekular na timbang at maaaring mabilis na maibalik ang orihinal nitong conform sa maraming mga kaso.

Bilang karagdagan sa pagiging lubhang matatag,Ang mga RNases ay nasa lahat ng dako sa laboratoryo .Ang RNase ay isang biological defense mechanism.Para sa isang cell, ang exogenous RNA ay kadalasang nakamamatay.Kung ikukumpara sa exogenous DNA, ang exogenous RNA ay kadalasang mas mapanganib.Ang RNA ay masayang na-transcribe at isinalin, kaya halos lahat ng mga organismo ay nag-evolve ng RNases upang ipagtanggol laban sa pagsalakay ng exogenous RNA.Samakatuwid, ang mga bacterial cell na nilinang sa laboratoryo at ikaw na kumukuha ng RNA ay nagpapalabas ng aroma ng RNase.Ang mga likido sa katawan ng tao (laway, luha, atbp.) ay naglalaman ng malaking halaga ng RNase, kaya huwag umiyak kapag nasira ang RNA.Kung mas umiiyak ka, mas malala ang pagkasira ng RNA!!Si Sister Daiyu ay hindi angkop para sa RNA extraction!

Bilang karagdagan, ang iyong pinong balat ay naglalaman din ng maraming RNase, at ang mga marker, pipette, pintuan ng refrigerator, at mga hawakan ng pinto na nahawakan ng balat ay naglalaman din ng RNase.

Sa napakaraming rambling, tingnan natin kung paano haharapin ang RNases.

Ang unang bagay na iniisip ng lahat kapag nag-aalis ng RNA ayDEPC(diethyl pyrocarbonate).Pangunahin ng DEPC ang denature ng protina sa pamamagitan ng pagsasama sa imidazole ring ng RNase active group histidine, at sa gayon ay pinipigilan ang aktibidad ng enzyme.Ang 0.1% na DEPC ay maaaring magkaroon ng mas magandang epekto sa pag-alis sa Rnase, ngunit kailangan nating bigyang-pansin na ang DEPC ay isang kilalang carcinogen, kaya dapat bigyan ng espesyal na atensyon kapag ginagamit ito.

Para sa RNase, kailangan nating magsimula sa dalawang aspeto,ang una ay upang pagbawalan ang aktibidad ng endogenous RNase

Ang mga conventional RNA extraction reagents tulad ng guanidine isothiocyanate at DTT na nakapaloob sa Trizol ay maaaring magbukas ng disulfide bond ng RNase, ngunit mayroon pa ring ilang RNases, lalo na sa mga sample ng tissue, kaya bigyang-pansin ang mababang temperatura.

1.Ilubog kaagad ang sample ng tissue sa likidong nitrogen pagkatapos itong alisin, o sa isang komersyal na solusyon sa pangangalaga ng RNA.

2.Pagkatapos kunin ang RNA ng sample ng cell, idagdag ito sa lysis solution at i-lyse ito sa ice box

3. Pinakamainam na gumamit ng likidong nitrogen para sa paggiling kapag ang mga sample ng tissue ay homogenized.Kapag gumagamit ng electric homogenizer na walang likidong nitrogen, bigyang-pansin ang ganap na paunang paglamig ng homogenate adapter.

Ang pangalawa ay exogenous DNase

1.Maging ganap na armado, magsuot ng lab coat, magsuot ng maskara, at siguraduhing magsuot ng isang pares ng mga bagong guwantes (huwag masyadong matipid!! Dapat tandaan na ang Trizol ay sobrang kinakaing unti-unti, at ito ay napakalakas din sa pamamagitan ng guwantes, kaya huwag tumulo sa iyong mga kamay).

2.Ang lahat ng ginamit na pipette tip, EP tubes, PCR tubes at iba pang kagamitan ay dapat na de-RNase treated.Maaari itong ibabad sa 0.1% DEPC at pagkatapos ay i-pressure sa ilalim ng mataas na presyon.Bigyang-pansin ang operasyon sa isang fume hood.Ang mga lokal na tyrant ay maaaring direktang bumili ng mga consumable para sa pag-alis ng mga enzyme.

PS: Hayaan mong sabihin ko sa iyo ang isang tamad na pamamaraan.Bagama't hindi ganap na maalis ng mataas na temperatura at mataas na presyon ang RNase, aalisin nito ang malaking bahagi nito.Ang 2 beses ng mataas na temperatura at mataas na presyon ay may magandang epekto, at ang pagkuha ng RNA ay may kaunting epekto.

3.Ang alkohol ay maaaring mag-denature ng mga protina,kaya ang RNA extraction table ay maaaring punasan ng 75% alcohol , at ang mga guwantes ay maaari ding i-spray ng alkohol.

4.Ang huling RNA dissolving solution at centrifuge tube ay dapat ding tratuhin ng de-RNase.Ang tubig ng DEPC ay isang karaniwang ginagamit na solusyon sa pagtunaw ng RNA.Pag-usapan natin ang tamang paraan ng paghahanda ng tubig ng DEPC (tandaang i-repackage ang komersyal na DEPC kapag binili mo ito)

Idagdag ang DEPC sa ultrapure na tubig sa 1:1000, iling mabuti, hayaang tumayo magdamag sa 37°C, at i-sterilize sa 121°C sa ilalim ng mataas na temperatura at mataas na presyon sa loob ng 15 minuto.Ang tubig ng DEPC ay maaaring maimbak sa -20°C sa 1ml aliquots.

Sa wakas, sa pagbubuod: mababang temperatura ang susi, ang mga consumable ay pinangangasiwaan nang maayos, ganap na armado at hindi gaanong nagsasalita!

Well, iyon lang para sa diskarte ngayon.Nais ko sa iyo ang lahat ng konsentrasyon at kadalisayan ng RNA na iyong binanggit.Parehong A260/A280 ay 2.0!!!

Siyempre, kung gagamit ka ng aroom temperature operation RNA extraction kit, maaaring hindi ka makatagpo ng mga problema sa itaas.

Ang operasyon sa temperatura ng silid, nang walang pagdaragdag ng DNase, ay kinukuha ang kabuuang RNA mula sa mga cell sa loob ng 11 minuto, at kinukuha ang kabuuang RNA mula sa mga tissue ng hayop o halaman sa loob ng 30 minuto.

Para sa mga sample ng pagsubok, mangyaring makipag-ugnayan sa:overseas@foregene.com

Kaugnay na Mga Produkto:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/