Mga FAQ para saAnimal Total RNA Isolation kit

Ang sumusunod na pagsusuri ng mga problemang maaaring makaharap mopagkuha ng tissue/cell RNA ng hayop will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

Ang RNA ay hindi nakuha o ang RNA yield ay mababa

Kadalasan mayroong iba't ibang mga kadahilanan na nakakaapekto sa kahusayan sa pagbawi, tulad ng: nilalaman ng sample ng tissue na RNA, paraan ng operasyon, dami ng elution, atbp.

1. Ice bath o cryogenic (4 °C) centrifugation ay isinagawa sa panahon ng operasyon.

Rekomendasyon: Magpatakbo sa temperatura ng silid (15-25 ° C) sa buong proseso, huwag mag-ice bath at mag-centrifuge sa mababang temperatura.

2. Hindi wastong pag-iimbak ng sample o labis na oras ng pag-iimbak ng sample.

Rekomendasyon: Mag-imbak ng mga sample sa -80 °C o mag-freeze sa liquid nitrogen at iwasan ang paulit-ulit na paggamit ng freeze-thaw;subukang gumamit ng sariwang tissue o kulturang selula para sa pagkuha ng RNA.

3. Hindi sapat na sample lysis.

Rekomendasyon: Kapag nag-homogenize ng tissue, siguraduhin na ang tissue ay sapat na homogenized at ang tissue cells ay sapat na nahati upang ipaliwanag ang paglabas ng RNA.

4. Ang eluent ay hindi naidagdag nang tama.

Rekomendasyon: Kumpirmahin na ang RNase-Free ddH₂Ang O ay idinagdag nang patak-patak sa gitna ng lamad ng haligi ng purification.

5. Ang tamang dami ng absolute ethanol ay hindi naidagdag sa Buffer RL2 o Buffer RW2.

Rekomendasyon: Sundin ang mga tagubilin, idagdag ang tamang dami ng absolute ethanol sa Buffer RL2 at Buffer RW2 at haluing mabuti bago gamitin ang kit.

6. Hindi angkop ang sample dose ng tissue.

Rekomendasyon: Gumamit ng 10-20 mg ng tissue o (1-5) × 10⁶cell bawat 500 μl buffer RL1, dahil ang labis na paggamit ng tissue ay maaaring magresulta sa pagbawas ng RNA extraction.

7. Hindi wastong dami ng elution o hindi kumpletong elution.

Rekomendasyon: Ang dami ng elution ng purification column ay 50-200 μl;kung ang epekto ng elution ay hindi kasiya-siya, inirerekomendang palawigin ang oras ng paglalagay ng temperatura ng silid pagkatapos magdagdag ng preheated na RNase-Free ddH₂O, hal para sa 5-10 min.

8. Ang purification column ay may ethanol residue pagkatapos ng Buffer RW2 wash.

Rekomendasyon: Kung may nalalabi na ethanol pagkatapos ng paghuhugas ng Buffer RW2, walang laman na tube centrifugation para sa 1min, ang oras para sa walang laman na tube centrifugation operation ay maaaring tumaas sa 2min, o ang purification column ay maaaring ilagay sa room temperature para sa 5 min upang sapat na alisin ang natitirang ethanol.

Ang purified RNA ay nasira

Ang kalidad ng purified RNA ay nauugnay sa mga kadahilanan tulad ng pag-iingat ng sample, kontaminasyon ng RNase, at pagmamanipula, atbp.

1. Ang mga sample ng tissue ay hindi itinatago sa oras.

Rekomendasyon: Kung ang mga sample ng tissue o mga cell ay hindi ginagamit sa isang napapanahong paraan pagkatapos ng koleksyon, agad na cryopreserve sa -80 °C o liquid nitrogen.Upang kunin ang RNA, gumamit ng bagong kinuhang tissue o sample ng cell hangga't maaari.

2. Paulit-ulit na freeze-thawing ng mga sample ng tissue.

Rekomendasyon: Kapag nag-iimbak ng mga sample ng tissue, pinakamahusay na putulin ang mga ito sa maliliit na piraso para sa pangangalaga, at alisin ang isa sa mga piraso kapag ginagamit ang mga ito upang maiwasan ang paulit-ulit na freeze-thawing ng sample at ang pagkasira ng RNA.

3. Ang RNase ay ipinakilala o hindi nakasuot ng disposable gloves, mask, atbp. sa panahon ng operasyon.

Rekomendasyon: Ang mga eksperimento sa pagkuha ng RNA ay pinakamahusay na ginagampanan sa magkahiwalay na RNA manipulation room at ang talahanayan ay na-clear bago ang eksperimento.

Magsuot ng mga disposable gloves at mask sa panahon ng eksperimento upang mabawasan ang pagkasira ng RNA na dulot ng pagpapakilala ng RNase.

4. Ang mga reagents ay kontaminado ng RNase habang ginagamit.

Rekomendasyon: Palitan ng bagong Animal Total RNA Isolation Kit para sa mga kaugnay na eksperimento.

5. Ang mga centrifuge tubes, tip, atbp. na ginagamit sa pagmamanipula ng RNA ay kontaminado ng RNase.

Rekomendasyon: Kumpirmahin na ang mga centrifuge tube, tip, pipette, atbp. na ginagamit sa RNA extraction ay RNase-Free lahat.

Nakakaapekto ang purified na nakuhang RNA sa mga eksperimento sa ibaba ng agos

RNA purified sa pamamagitan ng pagdalisay haligi, kung ang asin ions, protina nilalaman ay masyadong malaki ay makakaapekto sa downstream eksperimento, tulad ng: reverse transcription,Northern Blot et al.

1. Ang elutioned RNA ay may mga residue ng salt ion.

Rekomendasyon: Kumpirmahin na ang tamang dami ng ethanol ay naidagdag sa Buffer RW2 at magsagawa ng 2 purification column washes sa centrifugal speed na ipinahiwatig para sa operasyon;kung mayroong anumang nalalabi sa salt ion, iwanan ang column ng purification sa Buffer RW2 sa loob ng 5 min sa temperatura ng silid at magsagawa ng centrifugation upang mapakinabangan ang pag-alis ng kontaminasyon ng asin.

2. Ethanol residue sa elutioned RNA.

Rekomendasyon: Kumpirmahin na pagkatapos ng paghuhugas ng buffer RW2, isagawa ang walang laman na operasyon ng centrifugation ng tubo sa bilis ng centrifugation na ipinahiwatig para sa operasyon, dagdagan ang oras ng operasyon ng centrifugation ng walang laman na tube sa 2 min kung mayroon pa ring nalalabi na ethanol, o iwanan ito sa temperatura ng silid para sa 5 min pagkatapos ng centrifugation ng walang laman na tube upang mapakinabangan ang pag-alis ng residue ng ethanol.

Paghihiwalay ng mga uri ng sample ng nulceic acid

Ang RNA Isolation kit ng Foregene ay maaaring makakuha ng kabuuang RNA isolation/extraction mula sa mga sumusunod na sample na souces: Animal tissue, halaman, cell, viral, dugo, atbp.

Paano ko iimbak ang kit

Imbakan sa temperatura ng silid sa loob ng 24 na buwan.