Ang sumusunod na pagsusuri ng mga posibleng problema saBuccalpamunas/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Ang haligi ng paglilinis ay barado

Sa kit na ito, sa genomic DNA extraction operation, ang purification column ay direktang na-adsorbed sa sample na enzymatic lysis mixture na walang centrifugation step, at ang purification column ay maaaring ma-block dahil sa hindi kumpletong enzymization at mataas na lagkit ng sample.

Ang mga sumusunod na posibleng dahilan ay ang mga sumusunod:

1. Hindi kumpletong enzymatic digestion ng mga sample ng tissue.

Rekomendasyon: Ang sample na oras ng pagpoproseso ng Foregene Protease ay maaaring angkop na pahabain o ang supernatant ay maaaring kunin pagkatapos ng sentripugasyon sa 12,000 rpm (~13,400× g) sa loob ng 5 min.

2. Labis na paggamit ng mga sample ng tissue o malalaking tissue.

Rekomendasyon: Pinakamainam na huwag lumampas sa 1Buccal pamunas sa sample;kung ang sample ay masyadong malaki, dagdagan ang dosis ng Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 nang naaayon.

3. Masyadong mataas ang sample viscosity.

Rekomendasyon: Ang mga sample ay maaaring angkop na matunaw ng 10 mM ng Tris-HCl bago ang genomic DNA extraction.

4. Ang mga fragment ng blood card ay sinipsip.

Rekomendasyon: Ang transient centrifugation time ng step 6 ng blood spot (FTA Card) genomic extraction ay maaaring palawigin nang naaangkop.

Mababang ani o walang DNA

Kadalasan mayroong iba't ibang salik na nakakaapekto sa genomic DNA yield, kabilang ang sample na pinagmulan, sample na kondisyon ng storage, sample na paghahanda, pagmamanipula, atbp.

Ang genomic DNA ay hindi makukuha sa panahon ng pagkuha

Ang mga posibleng dahilan ay ang mga sumusunod:

1. Ang hindi wastong pag-iingat ng mga sample o pag-iimbak ng masyadong mahaba ay humahantong sa genomic DNA degradation.

Rekomendasyon: Ang mga oral swab ay dapat na bagong sample, at hindi ipinapayong gumamit ng mga preserved swab para sa genomic DNA extraction operations;dapat tiyakin ng mga sample ng blood spot na ang kalidad ay kwalipikado at ang oras ng pag-iimbak ay hindi dapat masyadong mahaba.

2. Ang masyadong maliit na paggamit ng tissue ay maaaring magresulta sa walang pagkuha ng kaukulang genomic DNA.

Rekomendasyon: Sundin angbuccal mga tagubilin sa pag-sample ng pamunas sa gabay sa operasyon, at punasan nang maraming beses hangga't maaari upang sapat na mga cell ang makakabit sa oral swab para sa pagkuha ng genomic DNA;para sa pagkuha ng sample ng blood spot, ang lugar ng paggupit ng dugo ay maaaring angkop na tumaas.

3. Ang Foregene Protease ay hindi wastong napreserba, na nagreresulta sa pagbaba sa aktibidad nito o hindi aktibo.

Rekomendasyon: Kumpirmahin ang mga kondisyon ng imbakan ngang Foregene Protease o palitan ito ng bagong Foregene Protease para sa enzymatic reaction.

4. Masyadong mahaba ang hindi wastong pag-iingat ng kit o oras ng pag-iimbak, na nagreresulta sa pagkabigo ng ilang bahagi sa kit.

Rekomendasyon: Bumili ng bagoBuccal swab DNAisolation kit para sa mga kaugnay na pamamaraan.

5. Ang Buffer WB ay hindi nagdaragdag ng ganap na ethanol.

Rekomendasyon: Kumpirmahin na ang buffer WB ay nagdaragdag ng tamang dami ng absolute ethanol.

6. Hindi wastong naidagdag ang eluent sa silicone film.

Rekomendasyon: Magdagdag ng 65°CAng pre-warmed eluent ay bumababa sa gitna ng silicone membrane at umalis sa temperatura ng kuwarto ng 5 min upang mapataas ang kahusayan ng elution.

Low-yield genomic DNA nakahiwalay

Ang mga sumusunod na posibleng dahilan ay ang mga sumusunod:

1. Ang hindi wastong pag-iingat ng mga sample o pag-iimbak ng masyadong mahaba ay humahantong sa genomic DNA degradation.

Rekomendasyon: Ang mga oral swab ay mas mainam na bagong sample, at ang mga napreserbang pamunas ay hindi dapat gamitin para sa genomic DNA extraction.

2. Kung ang dami ng sample ng tissue ay masyadong maliit, ang nakuhang genomic DNA content ay magiging mas kaunti.

Rekomendasyon: Sundin ang oral swab sampling na mga tagubilin sa operating guide, punasan nang maraming beses hangga't maaari upang sapat na mga cell ang makakabit sa oral swab para sa genomic DNA extraction.

3. Ang Foregene Protease ay hindi wastong napreserba, na nagreresulta sa pagbaba sa aktibidad nito o hindi aktibo.

Rekomendasyon: Kumpirmahin ang mga kondisyon ng imbakan ngthe Foregene Protease o palitan ito ng bago Foregene Protease para sa enzymatic reaction.

4. Mahusay na mga problema.

Rekomendasyon: Gamitin ang Buffer EB para sa elution;kung gumagamit ng ddH₂O o iba pang eluent, kumpirmahin na ang pH ng eluate ay nasa pagitan ng 7.0-8.5.

5. Ang eluate ay hindi wastong idinagdag nang patak-patak.

Rekomendasyon: Magdagdag ng eluent drop sa gitna ng silicone membrane at mag-iwan sa temperatura ng kuwarto ng 5 min upang mapataas ang kahusayan ng elution.

6. Masyadong kaunti ang naiipon ng elution liquid.

Rekomendasyon: Gumamit ng eluent para sa genomic DNA elution gaya ng kinakailangan sa mga tagubilin, hindi bababa sawalang kulang kaysa 15μl.

Low kadalisayan of genomic na DNAnakahiwalay

Ang mababang genomic DNA purity ay maaaring humantong sa pagkabigo o hindi kasiya-siyang resulta ng mga eksperimento sa ibaba ng agos, tulad ng: hindi mabubuksan ang mga enzyme, hindi makukuha ng PCR ang gene fragment ng interes, atbp.

Ang mga posibleng dahilan ay ang mga sumusunod:

1. Heteroprotein pollution, RNA pollution.

Pagsusuri: Hindi nahugasan ang column ng purification gamit ang Buffer PW;ang Buffer PW wash purification column ay hindi nahugasan gamit ang tamang centrifugal speed.

Rekomendasyon: Tiyakin na walang pag-ulan sa supernatant bago magdagdag ng ethanol;siguraduhing hugasan ang column ng purification ayon sa mga tagubilin, at hindi maaaring tanggalin ang hakbang na ito.

2. Impurity ion polusyon.

Pagsusuri: Ang buffer WB wash purification column ay tinanggal o nahugasan nang isang beses lang, na nagreresulta sa natitirang ionic na kontaminasyon.

Rekomendasyon: Siguraduhing hugasan ang Buffer WB 2 beses ayon sa itinuro upang maalis ang mga natitirang ions hangga't maaari.

3. Kontaminasyon ng RNA enzyme.

Pagsusuri: Ang mga dayuhang RNases ay idinagdag sa buffer;Hindi tama ang operasyon ng paghuhugas ng Buffer PW, na nagreresulta sa mga residue ng RNase, na nakakaapekto sa mga pang-eksperimentong operasyon ng RNA sa ibaba ng agos, gaya ng in vitro transcription.

Rekomendasyon: Foregene series nucleic acidisolaMaaaring alisin ng mga tion kit ang RNA nang walang karagdagang pagdaragdag ng RNase,kaya buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kitkailangan't magdagdag ng RNase;siguraduhing sundin ang mga tagubilin para sa Buffer PW washing purification column, at ang hakbang na ito ay hindi maaaring tanggalin.

4. Nalalabi sa ethanol.

Pagsusuri: Ang Buffer WB ay hindi nagsagawa ng empty tube centrifugation pagkatapos hugasan ang purification column.

Rekomendasyon: Isagawa ang tamang operasyon ng centrifugation na walang laman na tubo ayon sa mga tagubilin.

5. Iba pang polusyon sa karumihan.

Pagsusuri: Ang mga naka-save na sample o mga espesyal na sample ay hindi ginagamot.

Rekomendasyon: Masusing pretreat ang sample gaya ng itinuro.