Magtatag ng SOP ng eksperimento sa PCR upang gawing pamantayan ang pag-uugali ng mga tauhan ng eksperimento.
Mahigpit na sinusunod ng eksperimento ang mga operating procedure, at pinapaliit ang polusyon ng PCR na maaaring dulot ng mga salik ng tao o pumipigil sa paglitaw ng polusyon.Bilang karagdagan, ang eksperimento ay dapat magkaroon ng kaukulang propesyonal na kaalaman at kasanayan, kabilang ang kahusayan sa pagpapatakbo ng mga kaugnay na kagamitan, paglilinaw sa buong proseso ng trabaho, pag-master ng mga pamamaraan ng paggamot ng kontaminasyon at mga pamamaraan ng pagkontrol sa kalidad ng laboratoryo, at kakayahang wastong bigyang-kahulugan ang mga resulta ng pagsubok.
Magtatag ng isang karaniwang laboratoryo ng PCR.
Ang laboratoryo ng PCR ay nahahati sa apat na lugar sa prinsipyo, lalo na ang lugar ng paghahanda ng reagent, lugar ng pagpoproseso ng sample, lugar ng amplification, at lugar ng pagsusuri ng produkto ng amplification.Ang unang dalawang lugar ay mga pre-amplification area, at ang huling dalawang lugar ay post-amplification area.Dapat na mahigpit na paghiwalayin ang pre-amplification zone at ang post-amplification zone.Ang mga eksperimental na materyales, reagents, recording paper, pen, cleaning materials, atbp., ay maaari lamang dumaloy mula sa pre-amplification area patungo sa post-amplification area, iyon ay, mula sa reagent preparation area → sample processing area → amplification area → amplification product analysis area, at hindi dapat dumaloy pabalik .Ang daloy ng hangin sa laboratoryo ay dapat ding dumaloy mula sa pre-amplification area patungo sa post-amplification area, at hindi dumaloy pabalik.Ang perpektong disenyo ng laboratoryo ng PCR ay ipinapakita sa ibaba:
Figure A: Mainam na PCR laboratory setup mode na may negatibong pressure sa buffer room
Figure B: Mainam na PCR laboratory setup mode na may positibong presyon sa buffer room
Ang mga diagram ng pag-setup ng laboratoryo ng PCR na ibinigay sa Figure A at Figure B ay dapat na isang mas perpektong mode ng pag-setup, at ang laboratoryo na may mga kundisyon ay maaaring sumangguni sa mode na ito para sa disenyo.Para sa mga ordinaryong laboratoryo, inirerekumenda na ang PCR amplification area at ang product analysis area ay maaaring paghiwalayin, at ang pagbubukas ng takip ay dapat bawasan hangga't maaari sa sample preparation area at PCR amplification area.Tandaan: Ang mga produkto at pang-eksperimentong supply sa lugar ng pagsusuri ng produkto ay mahigpit na ipinagbabawal na dalhin sa lugar ng paghahanda ng sample at lugar ng amplification ng PCR.
Kung ang laboratoryo ay nagsasagawa lamang ng PCR detection at identification, inirerekumenda na gumamit ng fluorescent quantitative PCR sa halip na maginoo na PCR.
Ang fluorescence quantitative PCR detection resulta ay maaaring kolektahin at masuri sa pamamagitan ng fluorescence signal, kaya hindi na kailangang buksan ang takip para sa electrophoresis pagkatapos ng reaksyon, na iniiwasan ang kontaminasyon ng produkto ng PCR na dulot ng pagtagas ng mga produkto ng reaksyon upang bumuo ng mga aerosols.Kung dagdagan mo ang bilang ng mga butas ng takip sa panahon ng pag-load ng gel electrophoresis, malamang na mangyari ang kontaminasyon ng aerosol.Inirerekomenda na isulong ang paggamit ng quantitative PCR at unti-unting palitan ang qualitative PCR.
Ang UNG anti-PCR product contamination system ay ginagamit para sa PCR reaction.
Gumagamit ang system ng dUTP sa halip na dTTP.Pagkatapos ng reaksyon ng PCR, lahat ng produkto ng PCR (mga fragment ng DNA) ay isinama sa dUTP;sa susunod na round ng PCR reaction, ang UNG enzyme na idinagdag sa system ay incubated sa 37°C sa loob ng 5 minuto bago ang PCR, na maaaring partikular na pababain ang lahat ng DNA fragment na naglalaman ng dUTP, at pagkatapos ay magsagawa ng PCR reaction.Maaari nitong ganap na alisin ang kontaminasyon ng aerosol na dulot ng mga produkto ng PCR.Ang epekto ay ipinapakita sa figure sa ibaba:
Tandaan: Para sa direktang PCR series, maaari mong piliin ang mga seryeng produkto ng anti-PCR product contamination system ng ForegeneMagmungkahi
Para sa mga laboratoryo na nagsasagawa ng malakihang pagsusuri sa genotyping, lubos na inirerekomendang gamitin ang UNG anti-PCR product contamination system para sa pagsubok ng mga reagents bilang karagdagan sa pagtatayo ng mga makatwirang laboratoryo.
Paalala: Ang paggamit ng system na ito ay hindi maalis ang kontaminasyon sa produkto ng PCR na naidulot na.Samakatuwid, ang UNG system ay dapat gamitin sa simula ng nauugnay na pagsubok, at ang UNG system ay dapat gamitin para sa PCR amplification, upang maiwasan ang kontaminasyon ng mga produkto ng PCR False positive.
Inirerekomenda na gamitin ang Direct PCR-UNG system ng Foregene kapag nagsasagawa ng malakihang pagsubok, tulad ng:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Ang seryeng ito ng mga kit mula sa Foregenehindi lamang maaaring magsagawa ng PCR detection nang mabilis at sa isang malaking sukat, ngunit epektibo ring maiwasan at makontrol ang kontaminasyon ng produkto ng PCR.
Oras ng post: Mar-19-2021
