Nangunguna

Long non-coding RNA, lncRNA ay isang non-coding RNA na may haba na higit sa 200 nucleotides, sa pangkalahatan ay nasa pagitan ng 200-100000 nt.Kinokontrol ng lncRNA ang expression ng gene sa mga antas ng epigenetic, transcription at post-transcriptional, at nakikilahok sa X chromosome silencing, genome imprinting at chromatin modification, transcription activation, transcription interference, nuclear transport, cell cycle regulation, cell differentiation regulation, at dose compensation effect, ang mga epekto ng kompensasyon ng dosis (dosage marence na may kaugnayan sa iba pang mga sakit na nauugnay sa pag-unlad at pagpigil sa pag-unlad ng mga sakit sa tao) , at kasalukuyang isa sa mga hot spot sa larangan ng biomedicine.

01  Mga uri at katangian ng LncRNA

Ang lncRNA ay nahahati sa maraming uri ayon sa iba't ibang pinagmumulan ng pagbuo nito, tulad ng ipinapakita sa figure sa itaas.May mga sumusunod na katangian:

1. Ang mga lncRNA ay kadalasang mas mahaba, na may dynamic na expression at iba't ibang paraan ng pag-splicing sa panahon ng pagkita ng kaibhan
2. Kung ikukumpara sa coding genes, ang lncRNA ay karaniwang may mas mababang antas ng pagpapahayag
3. Karamihan sa mga lncRNA ay may malinaw na temporal at spatial na pagtitiyak ng pagpapahayag sa proseso ng pagkita ng kaibahan at pag-unlad ng tissue
4. May mga katangiang ekspresyon sa mga tumor at iba pang sakit
5. Ang mga subcellular na lokasyon ng lncRNA ay magkakaiba
6. Ang sequence ay mababa sa conservation, ngunit ang function ay may isang tiyak na antas ng conservation, atbp.

02 Mga Madalas Itanong tungkol sa LncRNA Reverse Transcription

Dahil sa mababang nilalaman ng lncRNA sa mga cell, mahabang haba at mataas na antas ng istraktura, ang naturang RNA ay kadalasang may mga kumplikadong istruktura tulad ng mga stem loop o hairpins, at ang RT-qPCR ay madaling kapitan ng mga problema ng hindi matagumpay na reverse transcription o mababang kahusayan.

03 LncRNA reverse transcription solution

Sa gitnang tuntunin, ang proseso ng mga RNA virus gamit ang kanilang sariling reverse transcriptase upang synthesize ang DNA gamit ang RNA bilang isang template ay tinatawag na reverse transcription.Ang proseso ng paggamit ng RNA virus reverse transcriptase upang synthesize ang cDNA template sa vitro ay tinatawag na reverse transcription.Ang mga pangunahing elemento na kasama sa reverse transcription system: RNA template, reverse transcriptase, primers at iba pang mga bahagi.

1. RNA template

Ang impluwensya ng template ng RNA sa reverse transcription ay makikita sa istraktura, kadalisayan at integridad nito.Kung mas mataas ang kadalisayan at integridad ng nakuhang RNA, mas mataas ang kahusayan ng reverse transcription at mas tumpak ang kasunod na mga resulta ng dami.Ang RNA na pinadalisay ng mga karaniwang ginagamit na RNA extraction reagents ay kadalasang naglalaman ng mga residue ng alcohol at guanidine salts, na may malakas na epekto sa pagbawalan sa karamihan ng reverse transcriptase.

2.Reverse transcriptase

Ang reverse transcriptase ay may mahalagang impluwensya sa buong reverse transcription system.Ang angkop na temperatura para sa reverse transcriptase na ginagamit sa karamihan ng mga laboratoryo ay karaniwang 42°C.Sa katunayan, ang pagbubukas ng mataas na antas ng istraktura ng RNA ay nangangailangan ng isang mas mataas na temperatura, at ang mga kinakailangan para sa reverse transcriptase ay mas mataas.

3.Primer

Kasama sa mga reverse transcription primer ang mga primer na partikular sa gene, mga random na primer, at mga primer na Oligo dT.Karamihan sa mga lncRNA ay hindi naglalaman ng mga polyA tails, at mahalaga na maayos na itugma ang mga random na primer na may Oligo dT.

4.Iba pang mga bahagi

Sa pagtingin sa katotohanan na ang RNA ay partikular na madaling i-degrade, ang pagpapakilala ng mga bahagi sa reverse transcription system ay maaaring mabawasan, na maaaring epektibong maiwasan ang pagpasok ng RNase at matiyak ang maayos na pag-unlad ng reverse transcription.

Foregenenakukuha mula sa template ng RNA, baligtarin ang transkripsyon sa qPCR

Komprehensibong i-escort ang iyong lncRNA detection

Hayop Kabuuang RNA Ipag-iisaKit (na may hanay ng pag-alis ng gDNA)

Kabuuang Cell RNA Ipag-iisaKit (na may hanay ng pag-alis ng gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(With gDNase)(Super Premix para sa first-strand cDNA synthesis mula sa lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Adbentahe ofPagkuha ng RNA:

Ang kit ay gumagamit ng third-generation RNA extraction technology, hindi na kailangang gumamit ng DNase.

11 minuto mula sa 96, 24, 12, at 6-well plate cultured cells, high-efficiency extraction ng gDNA-free, high-purity, de-kalidad na kabuuang cell RNA.

Mga kalamangan ng lncRNA reverse transcription:

Isang reverse transcription system na espesyal na binuo para sa LncRNA upang mabilis na maalis ang genomic DNA contamination.

Ang reverse transcription system ay may mataas na thermal stability at mayroon pa ring magandang reverse transcription performance sa 50°C.

Ang mga template na may mataas na GC na nilalaman at kumplikadong pangalawang istraktura ay maaaring baligtarin nang may mataas na kahusayan.

Mga kalamanganof qPCR:

Ang mainit na simula Foregene Taq Polymerase ay may mas mataas na kahusayan sa amplification, mas mataas na sensitivity ng amplification, at mas mataas na specificity ng amplification

Ang na-optimize na Real PCR Easy Mix ay ginagawang mas mataas ang sensitivity ng detection ng SYBR Green, at ang intensity ng fluorescence nito ay 3-5 beses kaysa sa mga katulad na produkto, na maaaring matugunan ang mga pangangailangan ng iba't ibang uri ng fluorescence quantitative na mga eksperimento.