Ang dami mong alam

Tungkol kay Npagkuha ng ucleic acid

Ang simula at pagtatapos ng purified nucleic acid

Ang lahat ay mahirap sa simula, ang purified nucleic acid ang pinaka

Pagsisimula ng mga eksperimento sa molekular, para sa mga kasunod na eksperimento

Ang tagumpay o kabiguan ay may mahalagang epekto.

Ang trace/ultra-trace UV spectrophotometer ay pinapaboran ng maraming siyentipikong mananaliksik dahil maaari nitong makita ang konsentrasyon ng nucleic acid at mga residue ng protina at asin ion nang simple, mabilis at matipid.

Tulad ng alam nating lahat, ang A260 ay nangangahulugan ng nucleic acid absorbance OD value, ang A280 ay nangangahulugan ng protein concentration absorbance OD value, ang A230 ay nangangahulugan ng salt ion concentration absorbance OD value, kaya ang A260 ay maaaring mag-convert ng nucleic acid concentration, A260/280 ay nangangahulugan ng protein residue, A260/230 ay nangangahulugan ng salt ion residue, ngunit ito ay sa pamamagitan ng malaking bilang ng mga resulta ng pagtuklas ng mga mananaliksik, ito ay isang panukat na batayan lamang ng mga mananaliksik.nakasanayan” upang maniwala na maipaliwanag nito ang kadalisayan ng DNA at RNA saisang tiyak na lawak.Ito ay hindi lamang ang pamantayan para sa pagkakakilanlan ng nucleic acid yield at kadalisayan, ito ay ginagamit lamang bilang isang sanggunian, at ito ay hindi isang "gold standard".

Ang Thermo Fisher ND-2000 manual ay nagbibigay-diin sa pagiging maaasahan ng mga resulta ng pagsubok

Ang dahilan ay ang mga resulta na nakuha sa pamamagitan ng paggamit ng micro/ultramicro UV spectrophotometer ay sumasalamin lamang sa ani at kadalisayan ng nucleic acid mula sa gilid, at mayroong maraming mga salik na nakakaimpluwensya (optical path, sample volume, sample concentration, pH value, iba pang mga ions na nakakaapekto sa pagsukat ng absorbance, atbp.), ang sinusukat na halaga ng OD ay hindi kinakailangang tumpak.Kasabay nito, dahil sa kakulangan ng specificity ng absorbance value determination material, single-stranded DNA, double-stranded DNA, RNA, dNTPs, at ilang mga protina lahat ay may absorption peak sa 260nm wavelength, at ang konsentrasyon na tinutukoy ng A260 lamang ay hindi nangangahulugang ang tunay na DNA o RNA.Ang konsentrasyon, at ang integridad at pagkasira nito ay hindi maaaring hatulan.

Kaya kung paano hatulan ang kalidad ng aming purified nucleic acid?Bilang karagdagan sa paggamit ng micro/ultramicro UV spectrophotometer para sa pagtuklas, ang mga pamamaraan tulad ng agarose gel electrophoresis ay kinakailangan din upang biswal na ipakita ang kadalisayan at integridad ng nucleic acid, at upang ipahiwatig ang konsentrasyon sa isang tiyak na lawak.Sa ganitong paraan, ang ani ng nucleic acid at kadalisayan na nakuha mula sa mga resulta ng pagtuklas ng iba't ibang mga pamamaraan ay kapani-paniwala.

Pang-eksperimentong paghahambing sa tsart

Ang genomic DNA ng H1299 na mga cell ay nakuha gamit ang DNA Extraction kit ng kumpanya A, at nakita ang malaking kontaminasyon ng karumihan, na nagreresulta sa mataas na mga halaga ng OD

(Halaga ng pagsukat ng OD at kaukulang electropherogram)

Index ng pagsusuri

Mayroon bang "pamantayan ng ginto" para sa ani ng nucleic acid at pagsusuri sa kalidad?

Sa pagkakaalam natin, walang simple, mabilis at murang paraan.Kung ito man ay spectrophotometer, gel electrophoresis, o mass spectrometry, lahat sila ay sumasalamin sa konsentrasyon at kadalisayan ng nucleic acid sa solusyon mula sa iba't ibang aspeto, at kailangan silang hatulan sa pamamagitan ng pagtukoy sa isa't isa.

Ang pinakamahusay na index ng pagsusuri ay palagingang follow-up na pang-eksperimentong aplikasyon.Hindi ito nakakaapekto sa kahusayan ng reverse transcription at PCR amplification.Ang pagkuha ng maaasahang mga produkto ng amplification at mga halaga ng Ct, at ang pagkuha ng kumpletong pagkakasunud-sunod sa pamamagitan ng pagkakasunud-sunod ay matagumpay na pagkuha ng nucleic acid.

Sa kabuuan, ang pananaw ng ratio-only na teorya ay dapat na hamunin ng pananaw ng "paggamit ng magagandang resulta ng pang-eksperimentong downstream bilang mahusay na mga parameter ng pagkuha"!

Inirerekomendang Foregene DNA RNA extraction kit para makakuha ng mataas na DNA/RNA purity:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/