Ang pagsusuri sa laboratoryo ay nagsisimula sa pagkolekta ng sample, at ang pagkolekta ng sample ay ang pinakamadaling makaligtaan.Ang pinakamahalagang bagay para sa pagkolekta ng sample ay ang piliin ang tamang uri ng sample, gumamit ng naaangkop na mga tool sa pag-sample, at magsagawa ng makatwirang transportasyon at pagproseso.

I.Uri ng sample

Ang mga karaniwang uri ng sample ay ang mga sumusunod:

Ang paraan ng pag-sample ay maaaring sumangguni sa mga teknikal na detalye para sa pagsubaybay sa kapaligiran ng bagong coronavirus sa merkado ng agrikultura (bazaar)”:

1. Mga sample ng pamunas mula sa mga pamunas sa lalamunan, mga kamay, damit at iba pang mga bagay ng mga practitioner: kinakailangang gamitin ang solusyon sa pangangalaga ng virus sa virus sampling tube at ganap na ipasok ang mga sampling cotton swabs.Ang ibabaw ng lupa) ay paulit-ulit na inilalapat at hinuhugasan ng higit sa 3 beses.Kasabay nito, kinakailangang magsagawa ng multi-point distributed sampling sa ibabaw ng na-sample na bagay.

2. Mga sample ng swab sa ibabaw ng pagkain: Ang mga sample ng pagkain ay hindi maaaring direktang kolektahin.Ang pagkain na kokolektahin ay dapat na maingat na paghiwalayin at itago sa isang malinis na sampling bag bago mangolekta ng mga sample ng pamunas.Kinakailangang gamitin ang solusyon sa pag-iingat ng virus sa virus sampling tube, pagkatapos ganap na ibabad ang sampling cotton swab, upang paulit-ulit na pahiran at banlawan ang ibabaw ng sample ng pagkain na kokolektahin nang higit sa 3 beses.Kasabay nito, kinakailangang magsagawa ng multi-point distributed sampling sa sample surface.

3. Mga sample ng dumi sa alkantarilya: Ayon sa pamamahagi ng sistema ng paagusan sa merkado, pumili ng 2-3 mga lokasyon ng sampling ng dumi sa alkantarilya, na tumutuon sa koleksyon ng internal pipe network, sa ibaba ng agos ng direksyon ng daloy ng tubig, o ang koneksyon sa network ng pipe ng munisipyo.Upang mangolekta ng sample ng pamunas, ilubog ito sa dumi sa alkantarilya gamit ang isang sampling cotton swab upang ma-adsorb ang dumi sa alkantarilya at banlawan ito sa sampling tube nang higit sa 3 beses.Upang mangolekta ng mga sample ng dumi sa alkantarilya, gumamit ng mga polyethylene na plastik na bote upang mangolekta ng 30-500 mL na sample ng tubig sa dumi sa alkantarilya;para sa koleksyon ng dumi sa alkantarilya na may volume na higit sa 500 mL, maaaring gumamit ng mga polyethylene plastic bucket o on-site na sample ng tubig na espesyal na kagamitan sa pagpapayaman.Kasabay nito, kinakailangang magsagawa ng multi-point distributed sampling para sa lokasyon ng sampling ng dumi sa alkantarilya.

4. Mga sample ng hayop: Para sa mga buhay na hayop, ang mga sampling swab ay maaaring gamitin upang mangolekta ng mga pamunas sa ibabaw ng katawan, oropharyngeal swab at anal swab, at ang mga sample ng dumi o pagtatago ay maaari ding kolektahin at itala nang naaayon sa record sheet.Para sa mga sample ng hayop na sumailalim sa pagbabalat, atbp., gumamit ng cotton swab upang kolektahin ang kanilang ibabaw ng katawan at mga sample ng swab sa lukab ng katawan.Kinakailangang gamitin ang solusyon sa pag-iingat ng virus sa virus sampling tube upang ganap na makalusot sa sampling cotton swab, at pagkatapos ay ulitin ang paglalagay sa ibabaw ng sample ng pagkain na kokolektahin.Mahigit 3 beses ang shabu.Kasabay nito, kinakailangang magsagawa ng multi-point distributed sampling sa sample surface.

5. Iba pang kagamitan: mga lalagyan para sa pagdadala at pagpaparami ng mga hayop tulad ng mga kulungan o tangke ng isda.Una, obserbahan o unawain ang mga partikular na uri ng hayop na iniimbak at pinarami sa lalagyan, at kolektahin ang mga sample ng pamunas sa panloob na dingding ng lalagyan o mga likidong sample ng mga nilalaman.

6. Mangolekta ng mga sample ng aerosol sa mga lugar kung saan nagtitipon ang mga tao, mga lokal na lugar ng kalakalan, mga opisina, at mga silid pahingahan na may mahinang bentilasyon.

II.Sampling tools
1. Tubong pangongolekta ng dugo
Kung kailangan mong gumawa ng nucleic acid testing at anticoagulant sample sa ibang pagkakataon, inirerekomendang gumamit ng vacuum blood vessel na naglalaman ng EDTA anticoagulant upang mangolekta ng dugo;para sa mga sample ng serum, inirerekumenda na gumamit ng isang vacuum na daluyan ng dugo na walang anticoagulant.

2. Sampling pamunas

Inirerekomenda na gumamit ng polypropylene swabs sa halip na calcium alginate swabs o swab na may mga kahoy na poste, dahil maaaring naglalaman ang mga ito ng mga sangkap na hindi aktibo ang ilang mga virus at pumipigil sa pagsusuri sa PCR.Ang mga pamunas na may mga ulo ng koton ay hindi maaaring gamitin, dahil ang mga hibla ng koton ay may malakas na adsorption ng protina at hindi madaling ma-eluted sa kasunod na solusyon sa pangangalaga.

Sa “Technical Specifications for 10-in-1 Mixed Collection and Detection of New Coronavirus Nucleic Acids”, malinaw na itinakda na “ang sampling swab ay dapat gawa sa polyester, nylon at iba pang non-cotton at non-calcium alginate na materyales, at ang hawakan ay dapat gawa sa hindi kahoy na materyal.Ang breaking point ay mga 3cm mula sa tuktok ng swab head, na madaling masira."

Binanggit din ng CDC sa Estados Unidos ang "Gumamit lamang ng mga synthetic fiber swab na may plastic o wire shafts.Huwag gumamit ng calcium alginate swab o swab na may mga baras na gawa sa kahoy,dahil maaaring naglalaman ang mga ito ng mga sangkap na hindi aktibo ang ilang mga virus at pumipigil sa pagsusuri sa PCR.

Kasalukuyang malawakang ginagamit ay isang disposable sterile nylon flocking swab na sinamahan ng isang plastic rod.Ang flocking swab ay may mas mahusay na pagsipsip ng tubig at rate ng paglabas.Ayon sa iba't ibang sampling site, ang swab head ay mayroon ding iba't ibang laki at fibers.Ang kapal.”

3. Halimbawang solusyon sa pangangalaga sa transportasyon

Virus inactivation preservation solution: Ang naaangkop na dami ng guanidine salt concentration at iba't ibang bahagi ng lysis ng virus ay maaaring direktang mag-lyse ng virus upang palabasin ang nucleic acid, hindi aktibo ang RNase at DNase, at matiyak ang integridad ng nucleic acid, na maaaring magamit para sa kasunod na pagtuklas ng qPCR.Hindi ito maaaring gamitin para sa paglilinang at paghihiwalay ng virus.

Virus transport and preservation solution: naglalaman ng mga salts, amino acids, bitamina, glucose at protina na kailangan para sa kaligtasan ng virus, na maaaring mapanatili ang aktibidad ng virus.Maaari itong magamit para sa pagkuha ng nucleic acid at pagtuklas ng virus sa hinaharap, at maaari rin itong gamitin para sa paglilinang at paghihiwalay ng virus.

4. Sample na preservation tube at sample bag

Ang sample na storage tube ay dapat na isang sterile plastic tube na may screw cap na hindi sumisipsip ng nucleic acid.Ang bawat sample tube ay dapat na sakop ng sample bag upang maiwasan ang pagtagas at kontaminasyon ng sample.

III.Nakakasagabal na mga sangkap sa sample

Nakakasagabal na mga sangkap sa mga eksperimento sa PCR

1. endogenous interferent

Ang mga sangkap na naroroon sa sample ng katawan ay maaaring makagambala sa pagtuklas ng iba pang mga sangkap.

Dugo:heme (>1mg/ml), hemin (>0.1ng/μl), triglycerides, IgG, atbp.;

Ihi:Urea (20mM);

Dumi ng tao:halaman polysaccharides, cholate;

Tissue:protease, collagen;

Gatas: protease, calcium ion;

Droga: antibiotics, antiviral drugs, hormones, atbp.

iba pa.

2. exogenous interferent

Ito ay nagmumula sa mga sangkap na maaaring makagambala sa pagtuklas ng iba pang mga sangkap sa vitro.Mga sample na additives at substance na maaaring makontak sa panahon ng pagkolekta at pagproseso ng sample:

Mga panustos sa pagsubok: serum separation gel, sample collection container at rubber stopper, catheter, catheter flushing fluid, glove powder, atbp.

Panlaban sa pamumuo: heparin (>0.1 U/mL), EDTA (>0.5 mM), atbp.;

Mga organikong solvent: isopropanol (>0.1 IU/ml), betaine, dimethyl sulfoxide, formamide, glycerin, PEG, atbp.;

Mga disimpektante: alcohols (ethanol>1%), aldehydes, phenols (phenol>0.2%), peroxide, strong acids (HCL), strong alkalis (NaOH), atbp.;

Detergent:SDS (>0.005%);

Lupa: Humus

Dyestuff: Indigo

iba pa.

Sa ilalim ng aktwal na panlabas na mga kondisyon ng sampling, tulad ng pagkolekta ng mga sample sa kapaligiran, ang mga sample ay maaaring maglaman ng iba't ibang mga nakakasagabal na substance, at ang komposisyon ng mga nakakasagabal na substance sa bawat lokasyon ay iba, na nangangailangan ng mga eksperimento sa interference ng PCR na isakatuparan ayon sa mga lokal na kondisyon.

IV.Mga sample na kondisyon ng imbakan at transportasyon

Ang mga bagong kolektang klinikal na ispesimen ay dapat ipadala sa laboratoryo sa loob ng 2 hanggang 4 na oras pagkatapos ng koleksyon sa 2°C hanggang 8°C.Mag-imbak sa 4 ℃ sa loob ng 24h.Ang mga specimen na ginamit para sa paghihiwalay ng virus at pagtuklas ng nucleic acid ay dapat masuri sa lalong madaling panahon.Ang mga specimen na maaaring masuri sa loob ng 24 na oras ay maaaring itago sa 4°C;ang mga specimen na hindi matukoy sa loob ng 24 na oras ay dapat na nakaimbak sa -70°C o mas mababa (kung hindi- Iimbak sa 70°C sa refrigerator sa -20°C).

Buod:Ang standardized na koleksyon, transportasyon at imbakan ng mga sample ay mahalaga para sa kasunod na pagsubok.Ang mga maling negatibo ng maraming mga pagsubok sa laboratoryo ay sanhi ng hindi tamang pagkolekta, transportasyon at pag-iimbak ng mga sample na humahantong sa pagkasira ng viral nucleic acid.Gayunpaman, binabalewala pa rin ng maraming laboratoryo ang kahalagahan ng sampling.Sana ay mapukaw ng artikulong ito ang atensyon ng lahat sa sampling at makagawa ng mas siyentipiko at makatwirang sampling!

Kaugnay na produkto:

SARS-CoV-2 Variant Nucleic Acid Detection Kit (I) (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method)-Para sa Detection ng Mutants Mula sa Brazil, South Africa, at UK