Ang mga pamamaraan ng PCR at ang kontaminasyon ng nucleic acid aerosol sa mga laboratoryo sa pagsubok ng nucleic acid ay parang dalawang gilid ng barya.Maaari lang nating piliin kung mayroon o hindi, ngunit hindi natin mapipili kung gusto natin o gugulin.
1. Pagsusuri ng DNA remover
Upang makamit ang spatial na pag-alis ng nucleic acid aerosol contamination, kailangan munang i-screen out ang mga DNA removers na maaaring mag-alis ng mga nucleic acid sa isang likidong estado.Dahil walang masyadong DNA removers na talagang gumagana.Para sa pang-eksperimentong paraan, mangyaring sumangguni sa: DNA remover ay hindi maaaring maging isang "lihim na sulok" ng laboratoryo!
Sa eksperimentong ito, 100 kopya/μL (CT humigit-kumulang 31) ng ASFV plasmid at DNA remover na na-quantified ng digital PCR ay pinaghalo sa pantay na dami, at pagkatapos ay nag-react sa temperatura ng silid para sa 10min, 20min at 30min ayon sa pagkakabanggit.Pagkatapos ng pagkuha ng nucleic acid, isinagawa ang qPCR amplification.Ang isang positibong kontrol na may halong plasmid at tubig ay inihambing.Dahil ang eksperimento ay hindi natapos sa parehong oras, maaaring mayroong isang tiyak na paglihis sa pagitan ng mga resulta, ngunit hindi ito nakakaapekto sa pagtatapos ng eksperimento.Sa ngayon, nasuri ko na ang 10 komersyal na produkto ng DNA remover.Tanging ang mga produkto ng No. 1, No. 6 at No. 8 lamang ang epektibong makapagpapababa ng plasmid DNA sa likidong estado.Ang ibang mga produkto ay halos walang epekto.
Talahanayan 1 Epekto sa pag-alis ng nucleic acid ng pang-komersyal na available na DNA remover
2. Ang eksperimento sa epekto ng pagtanggal ng DNA ng mga karaniwang ginagamit na disinfectant
1. Pagsusuri ng mga karaniwang ginagamit na disinfectant
Maraming uri ng disinfectant na karaniwang ginagamit sa mga laboratoryo: aldehydes, phenols, alcohols, quaternary ammonium salts, peroxides, chlorine preparations, at acids and bases.Ang mga epekto ng pagdidisimpekta ng mga disinfectant na ito sa mga mikroorganismo ay ganap na napatunayan ng mga eksperimento, ngunit Walang sapat na data ng pang-eksperimento sa epekto ng pagkasira ng mga nucleic acid.Ang mga laboratoryo sa pagsubok ng nucleic acid ay nangangailangan ng isang disinfectant na hindi lamang may magandang epekto sa pagdidisimpekta sa mga mikroorganismo, ngunit maaari ring pababain ang DNA.Ang mga resulta ng pagsusulit ay nagpapakita na dalawang chlorine paghahanda lamang ng 84 disinfectant at trichloroisocyanuric acid at 1 M hydrochloric acid ang nakakatugon sa mga kinakailangan.Dahil ang 1 M hydrochloric acid ay lubhang kinakaing unti-unti, inirerekomenda na ang mga paghahanda ng chlorine ay gamitin bilang pagtatapon ng basura sa mga laboratoryo sa pagsubok ng nucleic acid.Gayunpaman, ang mga paghahanda ng chlorine ay kinakaing unti-unti sa mga metal at hindi maaaring gamitin para sa pagdidisimpekta ng mga instrumento at kagamitan.
Talahanayan 2 Mga epekto sa pagtanggal ng DNA ng iba't ibang uri ng mga disinfectant
2. Ang pinakamababang epektibong konsentrasyon ng mga paghahanda ng chlorine
Ang mga disinfectant na nakabatay sa klorin ay may malakas na epekto sa pagkasira ng DNA, ngunit dahil sa kanilang pagkaagnas at pangangati ng metal, magagamit ang mga ito upang linisin ang sahig, mga non-metal na countertop, mga tip sa pagbabad, mga centrifuge tube at iba pang mga test item.
Ayon sa "Bagong Coronary Pneumonia Epidemic Disinfection Technical Guidelines": Ang mga pollutant (dugo, secretions at suka ng mga pasyente) ay makukuhang chlorine 5g/L-10g/L chlorine-containing disinfectant;Ang mga sahig, dingding, at ibabaw ng bagay ay gumagamit ng available na chlorine 1g/L Chlorine disinfectant: ang mga damit, bedding at iba pang tela ay ibabad muna sa chlorine disinfectant na may 0.5g/L na available na chlorine sa loob ng 30 minuto, at pagkatapos ay linisin gaya ng dati.
Talahanayan 3 Epekto sa pag-alis ng DNA ng iba't ibang konsentrasyon ng chlorine disinfectant
Ang mga resulta ng pagsubok ay nagpapakita na: kapag ang epektibong konsentrasyon ng chlorine ay mas malaki kaysa o katumbas ng 1.2 g/L, ang chlorine-containing disinfectant ay maaaring ganap na ibababa ang 100 kopya/μL plasmid kapag ito ay ginamit sa loob ng 5 minuto.Kapag kumikilos sa loob ng 10 minuto, 84 na disinfectant na may mabisang konsentrasyon ng chlorine na mas mataas sa o katumbas ng 0.6 g/L ay maaaring ganap na magpababa ng 100 kopya/μL ng mga plasmid.
3. Eksperimento sa pagtanggal ng hangin na nadumhan ng nucleic acid aerosol
Paano linisin ang hangin na nadumhan ng nucleic acid aerosol?Karamihan sa mga iniisip ay lumikha ng isang kapaligiran na kontaminado ng aerosol at pagkatapos ay linisin ito, o linisin ang mga nucleic acid pagkatapos ng kontaminasyon.Para sa akin, walang saysay ang isang eksperimento na hindi na mauulit at ang mga resulta ng eksperimento ay hindi masusuri sa dami, kaya humiram ako ng ilang paraan ng disinfectant air disinfection.Tingnan ang "GB27948-2020 Pangkalahatang Pangangailangan para sa Mga Air Disinfectant" at "Mga Teknikal na Pagtukoy sa Pagdidisimpekta"
1. Mga materyales sa pagsubok
1.1 DNA remover: Sa eksperimentong ito, dalawang available na pangkomersyong DNA remover 6 at 8 sa Talahanayan 1 ang napili.
1.2 Test plasmid: Isinasaalang-alang na ang CT value ng karamihan sa polusyon sa laboratoryo ay mas mataas sa 30, ang konsentrasyon ng ASFV gene plasmid na ginamit sa oras na ito ay humigit-kumulang 100 kopya/μL, at ang fluorescent quantitative PCR CT ay humigit-kumulang 31.07.Idagdag ang plasmid sa flocking cotton swab at tuyo sa hangin.
1.3 Instrumento sa pagsubok: Ang instrumento sa pagdidisimpekta ng Bilingkehan KVBOX, na mabait na sinusuportahan ng Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., ay may mahusay na pagganap ng air disinfection na may hydrogen peroxide disinfectant, at maaaring epektibong pumatay ng mga spores at iba pang microorganism.
1.4 Test space: isang closed transfer window na humigit-kumulang 0.1 cubic meters.
2. Paraan ng pagsubok
Ang halaga ng disinfectant na nakatakda sa disinfection machine ay 10ml, at ang konsentrasyon ay 100ml/m3, na mas mataas kaysa sa "GB27948-2020 General Requirements for Air Disinfectants": kapag gumagamit ng aerosol spray disinfection, ang halaga ng disinfectant ay dapat ≤10 ml/m3
Pagkatapos ng pag-spray, ito ay selyadong sa loob ng 2 oras, at pagkatapos ay ang flocked swab na may plasmid ay pinahiran ng TE, at ang flocked swab na may plasmid na walang fumigation ay itinakda bilang isang kontrol.Gumamit ng fluorescence quantitative PCR method para sa pagtuklas.
Talahanayan 4 Mga resulta ng pagsubok sa pagtanggal ng nucleic acid ng hangin
3. Mga resulta ng pagsusulit
Ang dalawang uri ng DNA removers na maaaring epektibong magpababa ng mga plasmid sa likidong estado ay walang epekto sa eksperimento sa pagtanggal ng nucleic acid sa hangin.Inaasahan ko ang paghahanap ng solusyon na maaaring magamit upang alisin ang polusyon ng nucleic acid aerosol sa hangin upang ganap na malutas ang problema ng polusyon ng nucleic acid aerosol sa mga laboratoryo ng pagsubok ng nucleic acid, ngunit walang nakitang ganoong produkto sa ngayon.Naniniwala ako na sa hinaharap, magkakaroon ng high-performance na nucleic acid removers na magagamit para sa air nucleic acid removal.
4. Iwanan ang mga ilusyon at tumuon sa pag-iwas
Gaano man ipagmalaki ng mga kumpanya ang kanilang mga produkto sa pagtanggal ng nucleic acid, iminumungkahi ko na ang karamihan sa mga kaibigan na nakikibahagi sa pagsusuri ng nucleic acid ay sumuko sa isang beses at para sa lahat ng mga ilusyon at kilalanin ang katotohanan: napakahirap alisin ang hangin na nadumhan ng mga nucleic acid aerosol, o gumawa ng isang solidong hakbang sa pag-iwas at gawain sa pang-araw-araw na pagsubaybay!
Oras ng post: Set-10-2021
