Mga Tip para sa Pagpapabuti ng Glue Recovery

1. Taasan ang sample load sa panahon ng electrophoresis.

2. Gumamit ng bagong inihandang electrophoresis buffer.

3. Kapag pinuputol ang pandikit, subukang gupitin lamang ang pandikit gamit ang mga piraso upang mabawasan ang dami ng pagputol ng kola: hindi kailangan ng pandikit na may kaunting mga fragment ng layunin, kung hindi man ay makakaapekto ito sa rate ng pagbawi.

4. Pagkatapos matunaw ang dalawa o higit pang piraso ng pandikit, gumamit ng tubo gaano man kalaki ang volume at ilipat ito sa parehong column.

5. Ang solusyon na idinagdag sa sol ay maaaring maging kaunti pa, na mas nakakatulong sa pagbubuklod ng DNA sa lamad, ngunit sa pangkalahatan ay hindi lalampas sa 750ul.

6. Ang susi sa pagbawi ng gel ay ang pagbubuklod ng DNA sa column sa pamamagitan ng konsentrasyon ng asin, acidity (charge) at hydrophobicity ng solusyon sa column.Samakatuwid, kung ang pH ng electrophoresis buffer ay masyadong mataas, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) ay maaaring idagdag sa sol;upang mas mahusay na maharang ang mga molekula ng DNA sa lamad, 30% isopropanol ay maaaring idagdag sa init sa likido pagkatapos matunaw ang pandikit.

7. Bago idagdag ang eluent, iwanan ang column sa temperatura ng silid sa loob ng ilang minuto (mga 10 minuto) upang ganap na sumingaw ang ethanol.

8. Panghuli, magdagdag ng mas kaunting eluent upang mabawasan ang dami ng pagbawi.Sa pangkalahatan, ang 30-50μl eluent ay ginagamit para sa elution (hindi masyadong maliit, kung hindi man ay hindi nito mababasa ang lamad, na hindi nakakatulong sa elution);ang mga patak ng elution ay nasa gitna ng lamad, upang ganap na maalis ang DNA na nakagapos sa lamad.

9. Pagkatapos idagdag ang eluent, maaari itong i-eluted sa isang paliguan ng tubig na 55 degrees para sa 5 minuto o ilagay sa isang paliguan ng tubig na 50 degrees para sa higit sa 10 minuto, o selyadong sa isang parafilm sa 4 degrees sa magdamag, at pagkatapos ay centrifuged para sa pagbawi sa susunod na araw, ang epekto ay mabuti.

10. Idagdag ang centrifuged eluate pabalik sa adsorption column at centrifuge muli.

Mga detalyadong pamamaraan at pamamaraan para sa pagbawi ng produkto ng PCR

1. Ordinaryong pag-recycle ng goma

Kung nais mong mabawi ang pandikit, pinakamahusay na gumamit ng isang kit, na maginhawa at may bahagyang mas mataas na rate ng pagbawi.Kung talagang kailangan mong bawiin ito nang manu-mano, maaari kang magdagdag ng 3 beses ang dami ng TE pagkatapos putulin ang pandikit.Pagkatapos matunaw sa isang paliguan ng tubig, ang phenol, phenol/chloroform ay malinis na nakuha, at ang ethanol ay namuo.Ayan yun.

2. Pagbawi ng DNA mula sa mababang melting point gels

Paglilinis ng mga Fragment ng DNA Magdagdag ng TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) na katumbas ng dami ng gel, at ilagay sa isang 65°C na paliguan ng tubig sa loob ng 5 minuto upang ganap na matunaw ang gel.

Matapos itong dalhin sa temperatura ng silid, ang isang pantay na halaga ng phenol (puspos ng TE, TE ay selyadong sa itaas na layer, at ang mas mababang layer ng phenol ay tinanggal) ay idinagdag, at ang halo ay malumanay na halo-halong (walang paghahalo kinakailangan), at centrifuge sa 12,000 rpm sa loob ng 3 minuto.Ulitin ng 1-2 beses.

Kunin ang supernatant, magdagdag ng 0.1 volume ng 3mol/L sodium acetate (pH 5.2) at 2.5 beses na volume ng absolute ethanol upang maisagawa ang ethanol precipitation.I-dissolve ang purified DNA na may naaangkop na halaga ng TE, sukatin ang nilalaman, at maghanda para sa paggamit (maaari itong gamitin para sa pagtatasa ng istraktura ng target na gene, paghahanda ng probe, atbp.).

3. Pagbawi ng PCR na may mahusay na pagtitiyak ng amplification

Kung maganda ang specificity ng PCR amplification, isa lamang itong simpleng purification at recovery ng PCR product.Maaari kang magdagdag ng 50ug/ml proteinase K sa produkto ng PCR, 37 degrees para sa 1h, i-extract nang isang beses gamit ang phenol/chloroform, i-extract nang isang beses gamit ang chloroform, at magdagdag ng 0.1 volume ng supernatant.Ang sodium acetate ay nakuhang muli sa pamamagitan ng precipitation na may 2.5 volume ng absolute ethanol.

Kaugnay na Mga Produkto:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/