Ang mababang ratio ng A260/A230 ay karaniwang sanhi ng mga impurities na may maximum na wavelength ng pagsipsip sa 230nm.Tingnan natin kung ano ang kasama sa mga impurities na ito:

• Mga karaniwang pollutant	Absorption wavelength	Epekto ng ratio
  protina	~230nm at 280nm	Sabay-sabay na pagbawas ng A260/A 280at A260/A 280mga ratios
  Guanidine asin	220-240 nm	Bawasan ang A260/A 280ratio
  Phenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm at 270nm	Bawasan ang A260/A 280ratio
  EDTA	~230nm	Bawasan ang A260/A 280ratio
  Ethanol	230-240 nm	Bawasan ang A260/A 280ratio

 
 
 
Absorption wavelength at contrast value ng mga karaniwang pollutant

Pkontaminasyon ng rotein
Ang polusyon sa protina ay maaaring ituring bilang ang pinakakaraniwang polusyon sa proseso ng pagkuha ng nucleic acid.Umiiral ang protina sa pagitan ng upper aqueous phase at ng lowerorganicyugto .Babawasan ng polusyon ang ratio ng A260/A280 at A260/A230 sa parehong oras, at ang ratio ng A260/A230 ay magbabago nang mas malinaw kaysa sa ratio ng A260/A280.
Sa panahon ng kasunodbaligtad na transkripsyonor mga reaksyon ng qPCR, Ang mga nalalabi sa protina ay maaaring humadlang o makagambala sa paggana ng enzyme.Ang pinakamahusay na paraan upang maiwasan ang kontaminasyon ng protina ay ang isaisip ang prinsipyo ng "sa halip na mas mababa kaysa sa higit pa, isang maliit na halaga ng maraming beses" kapag hinihigop ang supernatant.

2. Guanidinium polusyon
Ang hydrochloride (GuHCl) at guanidine thiocyanate (GTC) ay may epekto ng pag-denaturing ng mga protina, na maaaring mabilis na sirain ang mga lamad ng cell sa panahon ng proseso ng pagkuha ng nucleic acid, na nagiging sanhi ng denaturation ng protina at pag-ulan.Ang haba ng pagsipsip ng GuHCl at GTC ay nasa pagitan ng 220-240 nm, at angang natitirang guanidinium salt ay magbabawas sa ratio ng A260/A230.Kahit na ang natitirang guanidinium salt ay magbabawas ng ratio,ang epekto sa mga eksperimento sa ibaba ng agos ay talagang bale-wala.

3. Ang kontaminasyon ng Trizol
Ang pangunahing bahagi ng Trizol ay phenol.Ang pangunahing pag-andar ng phenol ay ang pag-lyse ng mga cell at paglabas ng mga protina at nucleic acid na mga sangkap sa mga cell.Kahit na ang phenol ay maaaring epektibong mag-denatur ng mga protina, hindi nito ganap na mapipigilan ang aktibidad ng RNase.Samakatuwid, ang 8 -hydroxyquinoline , guanidine isothiocyanate , β-mercaptoethanol, atbp. ay idinagdag sa TRIzol upang pigilan ang endogenous at exogenous RNase.
Kapag kinukuha ang cellular RNA, maaaring mabilis na i-lyse ng Trizol ang mga cell at pigilan ang nuclease na inilabas mula sa mga cell, at ang natitirang Trizol ay makabuluhang bawasan ang ratio ng A260/A230.
Paraan ng pagproseso: Kapag nagse-centrifuging, dapat tandaan na ang phenol sa Trizol ay madaling natutunaw sa bahagi ng tubig sa ilalim ng kondisyon na 4° at temperatura ng silid.

4. Nalalabi sa ethanol
Ang ethanol ay ginagamit sa panghuling proseso para ma-precipitate ang DNA habang tinutunaw ang mga salt ions na maaaring nakatali sa DNA.Ang pagsipsip ng wavelength ng pinakamataasabsorption peak ngAng ethanol ay nasa 230-240 nm din, nababawasan din ang ratio ng A260/A230.
Ang paraan ng pag-iwas sa ethanol residue ay maaaring ulitin ng dalawang beses sa panahon ng huling elution, pamumulaklak safume hoodpara sa dalawang minuto upang payagan ang ethanol na ganap na sumingaw bago magdagdag ng buffer para sa elution.
Gayunpaman, dapat itong malaman na ang ratio ay isang index lamang ng pagsusuri ng kalidad ng RNA.Kung ang mga nabanggit na operasyon ay mahigpit na kinokontrol, ang paglihis sa pagitan ng ratio at ang karaniwang hanay ay hindi magkakaroon ng malaking epekto sa mga eksperimento sa ibaba ng agos.
Kaugnay na Mga Produkto:
Animal Total RNA Isolation kit
Plant Total RNA Isolation kit
Cell Total RNA Isolation kit
Plant Total RNA Isolation kit Plus