Cell Total RNA Isolation Kit Kabuuang RNA Isolation Purification Kits mula sa cell
Paglalarawan ng Kit:
Ang mataas na purified at mataas na kalidad na kabuuang RNA ay maaaring makuha mula sa iba't ibang kulturang mga cell sa loob ng 11 minuto.
RNase-Free
Pinapatakbo sa temperatura ng silid (15-25 ℃)
Sa DNA-Cleaning Column
Mataas na ani ng RNA
Mabilis: Tapusin ang pagkuha sa loob ng 11 minuto
Kaligtasan: Wala Organic na kemikal
Paglalarawan
Ginagamit ng kit na ito ang spin column at formula na binuo ng Foregene, na mahusay na nakakakuha ng mataas na kadalisayan at mataas na kalidad na kabuuang RNA mula sa mga cell na na-culture sa 96, 24, 12, at 6-well plate.
Ang kit ay nagbibigay ng mahusay na DNA-Cleaning Column, na madaling paghiwalayin ang supernatant at cell lysate, magbigkis at mag-alis ng genomic DNA.Ang operasyon ay simple at nakakatipid ng oras.
Tang RNA-only na Column ay maaaring mahusay na magbigkis ng RNA gamit ang isang natatanging formula.Ang isang malaking bilang ng mga sample ay maaaring iproseso nang sabay-sabay.
Mga bahagi ng kit
| Komposisyon ng kit | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ML | 100 ML |
| Buffer cRL2 | 15 ML | 60 ML |
| Buffer RW1* | 25 ML | 100 ML |
| Buffer RW2 | 24 ML | 96 ML |
| RNase-Free ddH2O | 10 ML | 40 ML |
| RNA-Only Column | 50 | 200 |
| Hanay ng Paglilinis ng DNA | 50 | 200 |
| Pagtuturo | 1 | 1 |
*Mangyaring magsuot ng guwantes at magsagawa ng mga hakbang na proteksiyon sa panahon ng operasyon dahil ang Buffer cRL1 at Buffer RW1 ay naglalaman ng mga nakakainis na chaotropic salt.
Mga tampok at kalamangan
■ Ang buong proseso ay pinapatakbo sa temperatura ng silid (15-25 ℃), nang walang ice bath at low temperature centrifugation.
■ Ang buong kit ay RNase-Free, hindi kailangang mag-alala tungkol sa pagkasira ng RNA.
■ Ang DNA-Cleaning Column ay partikular na nagbibigkis sa DNA, upang maalis ng kit ang genomic DNA contamination nang hindi nagdaragdag ng karagdagang DNase.
■ Mataas na RNA yield: Ang RNA-only na Column at natatanging formula ay maaaring mahusay na maglinis ng RNA.
■ Mabilis na bilis: madaling patakbuhin at maaaring kumpletuhin sa loob ng 11 minuto.
■ Kaligtasan: Walang kinakailangang organikong reagent.
■ Mataas na kalidad: Ang purified RNA ay may mataas na kadalisayan, walang protina at iba pang mga dumi, at maaaring matugunan ang iba't ibang kasunod na mga eksperimento.
Application ng kit
Ito ay angkop para sa pagkuha at paglilinis ng kabuuang RNA mula sa mga kulturang selula sa 96, 24, 12, at 6-well plate.
Daloy ng trabaho
Diagram
Ang agarose gel battery diagram ng Cell Total RNA Isolation Kit ay ginagamot ang iba't ibang bilang ng mga cell sa itaas, 20μl volume elution, kumuha ng 2μl purified total RNA 1%.
Imbakan at buhay ng istante
Ang kit ay maaaring iimbak ng 12 buwan sa temperatura ng silid (15–25 ℃) o 2–8 ℃ para sa mas mahabang panahon (24 na buwan).
Ang buffer cRL1 ay maaaring itago sa 4 ℃ sa loob ng 1 buwan pagkatapos magdagdag ng 2-hydroxy-1-ethanethiol(opsyonal).
Ang RNA ay hindi nakuha o ang RNA yield ay mababa
Kadalasan mayroong iba't ibang mga kadahilanan na nakakaapekto sa kahusayan sa pagbawi, tulad ng: nilalaman ng sample ng tissue na RNA, paraan ng operasyon, dami ng elution, atbp.
1. Ice bath o cryogenic (4 °C) centrifugation ay isinagawa sa panahon ng operasyon.
Rekomendasyon: Magpatakbo sa temperatura ng silid (15-25 ° C) sa buong proseso, huwag mag-ice bath at mag-centrifuge sa mababang temperatura.
2. Hindi wastong pag-iimbak ng sample o labis na oras ng pag-iimbak ng sample.
Rekomendasyon: Mag-imbak ng mga sample sa -80 °C o mag-freeze sa liquid nitrogen at iwasan ang paulit-ulit na paggamit ng freeze-thaw;subukang gumamit ng sariwang tissue o kulturang selula para sa pagkuha ng RNA.
3. Hindi sapat na sample lysis.
Rekomendasyon: Kapag nag-homogenize ng tissue, siguraduhin na ang tissue ay sapat na homogenized at ang tissue cells ay sapat na nahati upang ipaliwanag ang paglabas ng RNA.
4. Ang eluent ay hindi naidagdag nang tama.
Rekomendasyon: Kumpirmahin na ang RNase-Free ddH2Ang O ay idinagdag nang patak-patak sa gitna ng lamad ng haligi ng purification.
5. Ang tamang dami ng absolute ethanol ay hindi naidagdag sa Buffer RL2 o Buffer RW2.
Rekomendasyon: Sundin ang mga tagubilin, idagdag ang tamang dami ng absolute ethanol sa Buffer RL2 at Buffer RW2 at haluing mabuti bago gamitin ang kit.
6. Hindi angkop ang sample dose ng tissue.
Rekomendasyon: Gumamit ng 10-20 mg ng tissue o (1-5) × 106cell bawat 500 μl buffer RL1, dahil ang labis na paggamit ng tissue ay maaaring magresulta sa pagbawas ng RNA extraction.
7. Hindi wastong dami ng elution o hindi kumpletong elution.
Rekomendasyon: Ang dami ng elution ng purification column ay 50-200 μl;kung ang epekto ng elution ay hindi kasiya-siya, inirerekomendang palawigin ang oras ng paglalagay ng temperatura ng silid pagkatapos magdagdag ng preheated na RNase-Free ddH2O, hal para sa 5-10 min.
8. Ang purification column ay may ethanol residue pagkatapos ng Buffer RW2 wash.
Rekomendasyon: Kung may nalalabi na ethanol pagkatapos ng paghuhugas ng Buffer RW2, walang laman na tube centrifugation para sa 1min, ang oras para sa walang laman na tube centrifugation operation ay maaaring tumaas sa 2min, o ang purification column ay maaaring ilagay sa room temperature para sa 5 min upang sapat na alisin ang natitirang ethanol.
Ang purified RNA ay nasira
Ang kalidad ng purified RNA ay nauugnay sa mga kadahilanan tulad ng pag-iingat ng sample, kontaminasyon ng RNase, at pagmamanipula, atbp.
1. Ang mga sample ng tissue ay hindi itinatago sa oras.
Rekomendasyon: Kung ang mga sample ng tissue o mga cell ay hindi ginagamit sa isang napapanahong paraan pagkatapos ng koleksyon, agad na cryopreserve sa -80 °C o liquid nitrogen.Upang kunin ang RNA, gumamit ng bagong kinuhang tissue o sample ng cell hangga't maaari.
2. Paulit-ulit na freeze-thawing ng mga sample ng tissue.
Rekomendasyon: Kapag nag-iimbak ng mga sample ng tissue, pinakamahusay na putulin ang mga ito sa maliliit na piraso para sa pangangalaga, at alisin ang isa sa mga piraso kapag ginagamit ang mga ito upang maiwasan ang paulit-ulit na freeze-thawing ng sample at ang pagkasira ng RNA.
3. Ang RNase ay ipinakilala o hindi nakasuot ng disposable gloves, mask, atbp. sa panahon ng operasyon.
Rekomendasyon: Ang mga eksperimento sa pagkuha ng RNA ay pinakamahusay na ginagampanan sa magkahiwalay na RNA manipulation room at ang talahanayan ay na-clear bago ang eksperimento.
Magsuot ng mga disposable gloves at mask sa panahon ng eksperimento upang mabawasan ang pagkasira ng RNA na dulot ng pagpapakilala ng RNase.
4. Ang mga reagents ay kontaminado ng RNase habang ginagamit.
Rekomendasyon: Palitan ng bagong Animal Total RNA Isolation Kit para sa mga kaugnay na eksperimento.
5. Ang mga centrifuge tubes, tip, atbp. na ginagamit sa pagmamanipula ng RNA ay kontaminado ng RNase.
Rekomendasyon: Kumpirmahin na ang mga centrifuge tube, tip, pipette, atbp. na ginagamit sa RNA extraction ay RNase-Free lahat.
Nakakaapekto ang purified na nakuhang RNA sa mga eksperimento sa ibaba ng agos
RNA purified sa pamamagitan ng pagdalisay haligi, kung ang asin ions, protina nilalaman ay masyadong malaki ay makakaapekto sa downstream eksperimento, tulad ng: reverse transcription,Northern Blot et al.
1. Ang elutioned RNA ay may mga residue ng salt ion.
Rekomendasyon: Kumpirmahin na ang tamang dami ng ethanol ay naidagdag sa Buffer RW2 at magsagawa ng 2 purification column washes sa centrifugal speed na ipinahiwatig para sa operasyon;kung mayroong anumang nalalabi sa salt ion, iwanan ang column ng purification sa Buffer RW2 sa loob ng 5 min sa temperatura ng silid at magsagawa ng centrifugation upang mapakinabangan ang pag-alis ng kontaminasyon ng asin.
2. Ethanol residue sa elutioned RNA.
Rekomendasyon: Kumpirmahin na pagkatapos ng paghuhugas ng buffer RW2, isagawa ang walang laman na operasyon ng centrifugation ng tube sa bilis ng centrifugation na ipinahiwatig para sa operasyon, dagdagan ang oras ng operasyon ng centrifugation ng walang laman na tube sa 2 min kung mayroon pa ring nalalabi na ethanol, o iwanan ito sa temperatura ng silid sa loob ng 5 m
