Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kits
Mga paglalarawan
Gumagamit ang kit na ito ng kakaibang lysis buffer system na mabilis na makakapaglabas ng RNA mula sa mga kulturang sample ng cell para sa mga reaksyon ng RT-qPCR, at sa gayon ay inaalis ang nakakaubos ng oras at matrabahong proseso ng paglilinis ng RNA.Ang RNA template ay maaaring makuha sa loob lamang ng 7 minuto.Ang 5×Direktang RT Mix at 2×Ang mga direktang qPCR Mix-SYBR reagents na ibinigay ng kit ay mabilis at epektibong makakakuha ng real-time na quantitative na mga resulta ng PCR.
5×Direktang RT Mix at 2×Ang Direct qPCR Mix-SYBR ay may malakas na inhibitor tolerance, at ang lysate ng mga sample ay maaaring gamitin bilang template para sa RT-qPCR nang direkta.Ang kit na ito ay naglalaman ng natatanging RNA high-affinity na Foregene reverse transcriptase, at Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, reaction buffer, PCR optimizer at stabilizer.
Mga pagtutukoy
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Mga bahagi ng kit
| Bahagi I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Bahagi II | Pambura ng DNA |
| 5× Direktang RT Mix | |
| 2× Direktang qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX Reference Dye | |
| RNase-Free ddH2O | |
| Mga tagubilin | |
Mga tampok at kalamangan
■Simple at epektibo : gamit ang teknolohiyang Cell Direct RT, ang mga sample ng RNA ay maaaring makuha sa loob lamang ng 7 minuto.
■ Maliit ang sample demand, kasing baba ng 10 cell ang maaaring masuri.
■ Mataas na throughput: mabilis nitong matutukoy ang RNA sa mga cell na naka-culture sa 384, 96, 24, 12, 6-well plate.
■ Ang DNA Eraser ay maaaring mabilis na mag-alis ng mga inilabas na genome, lubos na mabawasan ang epekto sa mga kasunod na resulta ng eksperimentong.
■ Ang na-optimize na RT at qPCR system ay ginagawang mas mahusay ang two-step na RT-PCR reverse transcription at mas tiyak ang PCR, at mas lumalaban sa mga RT-qPCR reaction inhibitors.
Application ng kit
Saklaw ng aplikasyon: mga kulturang selula.
- RNA na inilabas sa pamamagitan ng sample lysis: naaangkop lamang sa template ng RT-qPCR ng kit na ito.
- Maaaring gamitin ang kit para sa mga sumusunod na layunin: pagsusuri sa expression ng gene, pag-verify ng epekto ng siRNA-mediated gene silencing, pagsusuri sa gamot, atbp.
Diagram
Imbakan at buhay ng istante
Ang Bahagi I ng kit na ito ay dapat na nakaimbak sa 4 ℃;Ang Bahagi II ay dapat na naka-imbak sa -20 ℃.
Ang Foregene Protease Plus II ay dapat na nakaimbak sa 4℃, huwag mag-freeze sa -20 ℃.
Reagent 2×Direktang qPCR Mix-SYBR ay dapat na nakaimbak sa -20℃sa dilim;kung madalas gamitin, maaari din itong itabi sa 4℃ para sa panandaliang imbakan (gamitin sa loob ng 10 araw).
Real Time PCR primer na mga prinsipyo sa disenyo
Forward Primer at Reverse Primer
Para sa Real Time PCR, napakahalaga ng disenyo ng panimulang aklat.Ang mga panimulang aklat ay nauugnay sa pagtitiyak at kahusayan ng PCR amplification, at maaaring idisenyo na may kaugnayan sa mga sumusunod na prinsipyo:
Haba ng panimulang aklat: 18-30bp.
Nilalaman ng GC: 40-60%.
Halaga ng Tm: Ang software ng disenyo ng panimulang aklat, gaya ng Primer 5, ay maaaring magbigay ng halaga ng Tm ng panimulang aklat.Ang mga halaga ng Tm ng upstream at downstream na mga primer ay dapat na mas malapit hangga't maaari.Ang formula ng pagkalkula ng Tm ay maaari ding gamitin: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Kapag nagsasagawa ng PCR, ang temperaturang mas mababa sa halaga ng primer na Tm na 5 °C ay karaniwang pinipili bilang temperatura ng pagsusubo (ang katumbas na pagtaas ng temperatura ng pagsusubo ay maaaring tumaas ang pagtitiyak ng reaksyon ng PCR).
Mga panimulang aklat at mga produkto ng PCR:
Ang disenyo ng primer na PCR amplification haba ng produkto ay mas mabuti na 100-150bp.
Ang mga panimulang aklat sa disenyo sa pangalawang lugar ng istruktura ng template ay dapat na iwasan hangga't maaari.
Iwasan ang pagbuo ng 2 o higit pang mga komplementaryong base sa pagitan ng 3′ dulo ng upstream at downstream primers.
Ang primer 3′ terminal base ay hindi maaaring naroroon na may 3 karagdagang magkakasunod na G o C.
Ang mga primer mismo ay hindi maaaring magkaroon ng mga pantulong na istruktura, kung hindi, isang istraktura ng hairpin ay mabubuo, na makakaapekto sa PCR amplification.
Ang ATCG ay dapat na ipamahagi nang pantay-pantay hangga't maaari sa primer sequence, at ang 3′ terminal base ay dapat na iwasan bilang T.
Appendix 1：Cell Direct RT-qPCR Kit component supplement pack
1.Solusyon sa Cell Lysis
|
| |||
| Mga bahagi ng kit (24-well lysis system / well) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Bahagiako | Buffer CL | 20 ml | 100 ML |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BahagiII | Pambura ng DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Mga bahagi ng kit (20 μl reaction system) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direktang RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
|
| ||
| Mga bahagi ng kit (20 μl reaction system) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direktang qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 50× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Mga Manwal ng Pagtuturo:
