(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
Mga paglalarawan
Ang(96-well) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–SYBR Green Inagbibigayisang natatanging lysis buffer systemto mabilis na naglalabas ng RNAmula sa kulturang selulamga sample para sa mga reaksyon ng RT-qPCR, inaalis ang nakakaubos ng oras at matrabahoProseso ng paglilinis ng RNA, at tumatagal lamang ng 7 minuto upang makuha ang kinakailangang template ng RNA.Ang5× Direktang RT Mixat2× Direktang qPCR Mix-SYBRna ibinigay sa kahon ay maaaring mabilis atepektibong makakuha ng real-time na damiMga resulta ng PCR.
Ang 5× Direct RT Mix at 2× Direct qPCR Mix-SYBR ay may malakas na inhibitor tolerance, at maaaring gamitin ang lysate ng sample na susuriin bilang template para sa mahusay na reverse transcription at partikular na amplification.Ang reagent ay naglalaman ng natatanging Reverse Transcriptase ng Foregene na may mataas na pagkakaugnay para sa RNA, pati na rin ang Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , reaction buffer, PCR optimizer at stabilizer, at maaaring gamitin kasabay ng lysis buffer upang makita ang sample nang mabilis, madali at tumpak, at mayroon itong mga katangian ng mataas na sensitivity, malakas na pagtitiyak at mahusay na katatagan.
Ang kit ay naglalayon sa micro-system lysis ng 96-well cultured cells, at may magandang pagkakapareho at pagkakapare-pareho;ang mga bahagi ng kit ay nagbibigay ng 96 lysis reactions, 96 reverse transcription reactions at 96×2 qPCR reactions, na maaaring matugunan ang 96-well cells plate para sa isang beses na paggamit, pag-iwas sa polusyon na dulot ng paulit-ulit na pagbubukas, pagyeyelo at lasaw ng mga reagents at ang pagkasira ng pagganap ng reagent.
Mga bahagi ng kit
| Komposisyon ng kit ( 50 μL lysis system/20 μLRT sistema ng reaksyon /20μL qPCR na sistema ng reaksyon) | DRT-03011 | Puna | |
| 96T | |||
| BahagiI | BufferCL | 5 mL | CellLysis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Bahagi II | DNAPambura | 100 μL | |
| 5× Direktang RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direktang qPCR Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Reference Dye | 400µL | ||
| RNase- LibreddH2 O | 1.7mL |
| |
| Mtaun-taon | 1 piraso | 1 serving | |
*: Ang lysis reagent DNA Eraser ay kasama sa Part II ng kit;Maaaring bilhin nang hiwalay ang mga bahagi ng Cell Lysis, RT, at qPCR.
Mga tampok at kalamangan
■Simple at epektibo : gamit ang teknolohiyang Cell Direct RT, ang mga sample ng RNA ay maaaring makuha sa loob lamang ng 7 minuto.
■ Maliit ang sample demand, kasing baba ng 10 cell ang maaaring masuri.
■ Mataas na throughput: mabilis nitong matutukoy ang RNA sa mga cell na naka-culture sa 384, 96, 24, 12, 6-well plate.
■ Ang DNA Eraser ay maaaring mabilis na mag-alis ng mga inilabas na genome, lubos na mabawasan ang epekto sa mga kasunod na resulta ng eksperimentong.
■ Ang na-optimize na RT at qPCR system ay ginagawang mas mahusay ang two-step na RT-PCR reverse transcription at mas tiyak ang PCR, at mas lumalaban sa mga RT-qPCR reaction inhibitors.
Application ng kit
Saklaw ng aplikasyon: mga kulturang selula.
- RNA na inilabas sa pamamagitan ng sample lysis: naaangkop lamang sa template ng RT-qPCR ng kit na ito.
- Maaaring gamitin ang kit para sa mga sumusunod na layunin: pagsusuri sa expression ng gene, pag-verify ng epekto ng siRNA-mediated gene silencing, pagsusuri sa gamot, atbp.
Imbakan at buhay ng istante
Ang Bahagi I ng kit na ito ay dapat na nakaimbak sa 4℃;Ang Bahagi II ay dapat na naka-imbak sa -20 ℃.
Ang Foregene Protease Plus II ay dapat na nakaimbak sa 4℃, huwag mag-freeze sa -20 ℃.
Reagent 2×Ang direktang qPCR Mix-Taqman ay dapat na nakaimbak sa -20℃sa dilim;kung madalas gamitin, maaari din itong itabi sa 4℃ para sa panandaliang imbakan (gamitin sa loob ng 10 araw).
Real Time PCR primer na mga prinsipyo sa disenyo
Forward Primer at Reverse Primer
Para sa Real Time PCR, napakahalaga ng disenyo ng panimulang aklat.Ang mga panimulang aklat ay nauugnay sa pagtitiyak at kahusayan ng PCR amplification, at maaaring idisenyo na may kaugnayan sa mga sumusunod na prinsipyo:
- Haba ng panimulang aklat: 18-30bp.
- Nilalaman ng GC: 40-60%.
- Halaga ng Tm: Ang software ng disenyo ng panimulang aklat, gaya ng Primer 5, ay maaaring magbigay ng halaga ng Tm ng panimulang aklat.Ang mga halaga ng Tm ng upstream at downstream na mga primer ay dapat na mas malapit hangga't maaari.Ang formula ng pagkalkula ng Tm ay maaari ding gamitin: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Kapag nagsasagawa ng PCR, ang temperaturang mas mababa sa halaga ng primer na Tm na 5 °C ay karaniwang pinipili bilang temperatura ng pagsusubo (ang katumbas na pagtaas ng temperatura ng pagsusubo ay maaaring tumaas ang pagtitiyak ng reaksyon ng PCR).
- Mga panimulang aklat at mga produkto ng PCR:
- Ang disenyo ng primer na PCR amplification haba ng produkto ay mas mabuti na 100-150bp.
- Ang mga panimulang aklat sa disenyo sa pangalawang lugar ng istruktura ng template ay dapat na iwasan hangga't maaari.
- Iwasan ang pagbuo ng 2 o higit pang mga komplementaryong base sa pagitan ng 3′ dulo ng upstream at downstream primers.
- Ang primer 3′ terminal base ay hindi maaaring naroroon na may 3 karagdagang magkakasunod na G o C.
- Ang mga primer mismo ay hindi maaaring magkaroon ng mga pantulong na istruktura, kung hindi, isang istraktura ng hairpin ay mabubuo, na makakaapekto sa PCR amplification.
- Ang ATCG ay dapat na ipamahagi nang pantay-pantay hangga't maaari sa primer sequence, at ang 3′ terminal base ay dapat na iwasan bilang T.
Apendise1:Cell DirektaRT-qPCR Kit component supplement pack
1.Cell Lysis Solution
| Solusyon sa Cell Lysis | |||
| Mga bahagi ng kit (24-well lysis system / well) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Bahagiako | Buffer CL | 20 ml | 100 ML |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BahagiII | Pambura ng DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Mga bahagi ng kit (20 μl reaction system) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direktang RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Mga bahagi ng kit (20 μl reaction system) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direktang qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Mga Manwal ng Pagtuturo:
