Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kits Probe
Mga paglalarawan
Gumagamit ang produktong ito ng kakaibang lysis buffer system para mabilis na mailabas ang RNA mula sa mga kulturang sample ng cell para sa mga reaksyon ng RT-qPCR, inaalis ang nakakaubos ng oras at nakakapagod na proseso ng RNA purification, at 7 minuto lang para makuha ang kinakailangang template ng RNA, na may 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman na ibinigay ng kit na mabilis at mahusay na makakakuha ng real-time na mga resulta ng PCR.
Ang 5× Direct RT Mix at 2× Direct qPCR Mix-Taqman ay may malakas na inhibitor tolerance at maaaring magsagawa ng mahusay na pagbaligtad at partikular na amplification gamit ang lysate ng sample na susukatin bilang template.Ang reagent ay naglalaman ng Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer at Stabilizer, na maaaring gamitin kasama ng lysis buffer para mabilis at madaling makakita ng mga sample, at may mga katangian ng mataas na sensitivity, specificity at stability.
Mga pagtutukoy
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Mga bahagi ng kit
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Mga bahagi ng kit 20μl qPCR Reaction System | DRT-01021 | DRT-01022 | Tandaan | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Bahagi I | Buffer CL | 4 ml | 20 ml | Cell Lysis |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Bahagi II | Pambura ng DNA | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direktang RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direktang qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml | ||
| Manwal ng Pagtuturo | 1 piraso | 1 piraso | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman ay maaaring bilhin nang hiwalay
Mga tampok at kalamangan
■Simple at epektibo : gamit ang teknolohiyang Cell Direct RT, ang mga sample ng RNA ay maaaring makuha sa loob lamang ng 7 minuto.
■ Maliit ang sample demand, kasing baba ng 10 cell ang maaaring masuri.
■ Mataas na throughput: mabilis nitong matutukoy ang RNA sa mga cell na naka-culture sa 384, 96, 24, 12, 6-well plate.
■ Ang DNA Eraser ay maaaring mabilis na mag-alis ng mga inilabas na genome, lubos na mabawasan ang epekto sa mga kasunod na resulta ng eksperimentong.
■ Ang na-optimize na RT at qPCR system ay ginagawang mas mahusay ang two-step na RT-PCR reverse transcription at mas tiyak ang PCR, at mas lumalaban sa mga RT-qPCR reaction inhibitors.
Application ng kit
Saklaw ng aplikasyon: mga kulturang selula.
- RNA na inilabas sa pamamagitan ng sample lysis: naaangkop lamang sa template ng RT-qPCR ng kit na ito.
- Maaaring gamitin ang kit para sa mga sumusunod na layunin: pagsusuri sa expression ng gene, pag-verify ng epekto ng siRNA-mediated gene silencing, pagsusuri sa gamot, atbp.
Imbakan at buhay ng istante
Ang Bahagi I ng kit na ito ay dapat na nakaimbak sa 4℃;Ang Bahagi II ay dapat na naka-imbak sa -20 ℃.
Ang Foregene Protease Plus II ay dapat na nakaimbak sa 4℃, huwag mag-freeze sa -20 ℃.
Reagent 2×Ang direktang qPCR Mix-Taqman ay dapat na nakaimbak sa -20℃sa dilim;kung madalas gamitin, maaari din itong itabi sa 4℃ para sa panandaliang imbakan (gamitin sa loob ng 10 araw).
Real Time PCR primer na mga prinsipyo sa disenyo
Forward Primer at Reverse Primer
Para sa Real Time PCR, napakahalaga ng disenyo ng panimulang aklat.Ang mga panimulang aklat ay nauugnay sa pagtitiyak at kahusayan ng PCR amplification, at maaaring idisenyo na may kaugnayan sa mga sumusunod na prinsipyo:
- Haba ng panimulang aklat: 18-30bp.
- Nilalaman ng GC: 40-60%.
- Halaga ng Tm: Ang software ng disenyo ng panimulang aklat, gaya ng Primer 5, ay maaaring magbigay ng halaga ng Tm ng panimulang aklat.Ang mga halaga ng Tm ng upstream at downstream na mga primer ay dapat na mas malapit hangga't maaari.Ang formula ng pagkalkula ng Tm ay maaari ding gamitin: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Kapag nagsasagawa ng PCR, ang temperaturang mas mababa sa halaga ng primer na Tm na 5 °C ay karaniwang pinipili bilang temperatura ng pagsusubo (ang katumbas na pagtaas ng temperatura ng pagsusubo ay maaaring tumaas ang pagtitiyak ng reaksyon ng PCR).
- Mga panimulang aklat at mga produkto ng PCR:
- Ang disenyo ng primer na PCR amplification haba ng produkto ay mas mabuti na 100-150bp.
- Ang mga panimulang aklat sa disenyo sa pangalawang lugar ng istruktura ng template ay dapat na iwasan hangga't maaari.
- Iwasan ang pagbuo ng 2 o higit pang mga komplementaryong base sa pagitan ng 3′ dulo ng upstream at downstream primers.
- Ang primer 3′ terminal base ay hindi maaaring naroroon na may 3 karagdagang magkakasunod na G o C.
- Ang mga primer mismo ay hindi maaaring magkaroon ng mga pantulong na istruktura, kung hindi, isang istraktura ng hairpin ay mabubuo, na makakaapekto sa PCR amplification.
- Ang ATCG ay dapat na ipamahagi nang pantay-pantay hangga't maaari sa primer sequence, at ang 3′ terminal base ay dapat na iwasan bilang T.
Apendise1:Cell DirektaRT-qPCR Kit component supplement pack
1.Cell Lysis Solution
| Solusyon sa Cell Lysis | |||
| Mga bahagi ng kit (24-well lysis system / well) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Bahagiako | Buffer CL | 20 ml | 100 ML |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| BahagiII | Pambura ng DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Mga bahagi ng kit (20 μl reaction system) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direktang RT Mix | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Mga bahagi ng kit (20 μl reaction system) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direktang qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Mga Manwal ng Pagtuturo:
