Real Time PCR Easyᵀᴹ-Taqman
Paglalarawan ng Kit:
◮Simple—2× PCR Mix para mabawasan ang experimental error at oras ng operasyon
◮Ang partikular na—na-optimize na buffer at hot-start na Taq enzyme ay maaaring maiwasan ang hindi partikular na amplification at pagbuo ng primer dimer
◮High sensitivity—maaaring makakita ng mababang mga kopya ng template
◮Magandang versatility—tugma sa karamihan ng real-time na quantitative na mga instrumento ng PCR
Mga Paglalarawan ng Kit
Ang 2X Real PCR EasyTMMix-Taqman na ibinigay ng Real Time PCR EasyTM-Ang Taqman kit ay isang bagong premix system na gumagamit ng mga partikular na fluorescent probe para sa Real Time na mga reaksyon ng amplification ng PCR, na maaaring lubos na mapahusay ang pagtitiyak ng produkto at pagiging sensitibo sa reaksyon.Ang ROX ay ibinibigay bilang internal control dye.
2X Real PCR EasyTMAng Mix-Taqman ay naglalaman ng natatanging hot-start na Taq DNA Polymerase ng Foregene.Kung ikukumpara sa mga ordinaryong Taq enzymes, mayroon itong mga bentahe ng mataas na kahusayan sa amplification, malakas na partikular na kakayahan sa amplification at mababang mismatch rate.Maaari nitong bawasan ang hindi partikular na amplification at pagbutihin ang katumpakan ng PCR.
Mga pagtutukoy
| Real Time PCR EasyTM-Taqman | ||||
| Komposisyon ng kit (20μl system) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
| 200T | 500T | 1000T | 2000T | |
| 2×Tunay na PCRMadaliTMHaluin-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
| 20×ROX Reference Dye | 200 μl | 0.5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
| DNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
| Ipagtuturo | 1 | 1 | 1 | 1 |
Mga tampok at kalamangan
■ Simple—2X PCR Mix para mabawasan ang experimental error at oras ng operasyon
■ Ang partikular—na-optimize na buffer at hot-start na Taq enzyme ay maaaring maiwasan ang hindi partikular na amplification at primer dimer formation
■ Mataas na sensitivity—maaaring makakita ng mababang mga kopya ng template
■ Magandang versatility—katugma sa karamihan ng real-time na quantitative na mga instrumento ng PCR
Application ng kit
pagsusuri ng qPCR
Daloy ng trabaho
Graphic
Imbakan at buhay ng istante
Ang kit na ito ay dapat na nakaimbak malayo sa liwanag at dapat na nakaimbak sa -20 ℃.Kung madalas gamitin, maaari din itong itago sa 4 ℃ sa maikling panahon (10 araw).
Walang amplification signal
1. Ang Taq DNA Polymerase sa kit ay nawawalan ng aktibidad dahil sa hindi tamang pag-iimbak o pag-expire ng kit.
Rekomendasyon: Kumpirmahin ang mga kondisyon ng imbakan ng kit;muling magdagdag ng naaangkop na halaga ng Taq DNA Polymerase sa PCR system o bumili ng bagong Real Time PCR Kit para sa mga kaugnay na eksperimento.
2. Mayroong maraming mga inhibitor ng Taq DNA Polymerase sa template ng DNA.
Mungkahi: I-repurify ang template o bawasan ang dami ng template na ginamit.
3.Ang konsentrasyon ng Mg2+ ay hindi angkop.
Rekomendasyon: Ang konsentrasyon ng Mg2+ ng 2× Real PCR Mix na ibinibigay namin ay 3.5mM.Gayunpaman, para sa ilang espesyal na panimulang aklat at template, ang konsentrasyon ng Mg2+ ay maaaring mas mataas.Samakatuwid, maaari mong direktang idagdag ang MgCl2 upang ma-optimize ang konsentrasyon ng Mg2+.Inirerekomenda na taasan ang Mg2+ 0.5mM sa bawat oras para sa pag-optimize.
4. Ang mga kondisyon ng PCR amplification ay hindi angkop, at ang primer sequence o konsentrasyon ay hindi wasto.
Mungkahi: kumpirmahin ang kawastuhan ng pagkakasunud-sunod ng panimulang aklat at ang panimulang aklat ay hindi nasira;kung ang signal ng amplification ay hindi maganda, subukang babaan ang temperatura ng pagsusubo at ayusin ang konsentrasyon ng primer nang naaangkop.
5.Ang halaga ng template ay masyadong maliit o sobra.
Rekomendasyon: Magsagawa ng template linearization gradient dilution, at piliin ang konsentrasyon ng template na may pinakamagandang PCR effect para sa Real Time PCR na eksperimento.
Masyadong mataas ang halaga ng fluorescence ng NTC
1.Reagent contamination sanhi sa panahon ng operasyon.
Rekomendasyon: Palitan ng mga bagong reagents para sa Real Time PCR na mga eksperimento.
2.Naganap ang kontaminasyon sa panahon ng paghahanda ng PCR reaction system.
Rekomendasyon: Magsagawa ng mga kinakailangang hakbang sa proteksyon sa panahon ng operasyon, tulad ng: pagsusuot ng latex gloves, paggamit ng pipette tip na may filter, atbp.
3. Ang mga panimulang aklat ay nasisira, at ang pagkasira ng mga panimulang aklat ay magdudulot ng hindi tiyak na pagpapalakas.
Mungkahi: Gumamit ng SDS-PAGE electrophoresis upang matukoy kung ang mga primer ay nasira, at palitan ang mga ito ng mga bagong panimulang aklat para sa Real Time PCR na mga eksperimento.
Primer dimer o non-specific na amplification
1.Ang konsentrasyon ng Mg2+ ay hindi angkop.
Rekomendasyon: Ang konsentrasyon ng Mg2+ ng 2× Real PCR EasyTM Mix na ibinibigay namin ay 3.5 mM.Gayunpaman, para sa ilang espesyal na panimulang aklat at template, ang konsentrasyon ng Mg2+ ay maaaring mas mataas.Samakatuwid, maaari mong direktang idagdag ang MgCl2 upang ma-optimize ang konsentrasyon ng Mg2+.Inirerekomenda na taasan ang Mg2+ 0.5mM sa bawat oras para sa pag-optimize.
2.Ang PCR annealing temperature ay masyadong mababa.
Mungkahi: Taasan ang PCR annealing temperature ng 1 ℃ o 2 ℃ sa bawat pagkakataon.
3.Ang produkto ng PCR ay masyadong mahaba.
Rekomendasyon: Ang haba ng produktong Real Time PCR ay dapat nasa pagitan ng 100-150bp, hindi hihigit sa 500bp.
4. Ang mga panimulang aklat ay nasira, at ang pagkasira ng mga panimulang aklat ay hahantong sa paglitaw ng tiyak na pagpapalakas.
Mungkahi: Gumamit ng SDS-PAGE electrophoresis upang matukoy kung ang mga primer ay nasira, at palitan ang mga ito ng mga bagong panimulang aklat para sa Real Time PCR na mga eksperimento.
5. Ang PCR system ay hindi wasto, o ang sistema ay masyadong maliit.
Mungkahi: Ang sistema ng reaksyon ng PCR ay masyadong maliit ay magiging sanhi ng pagbaba ng katumpakan ng pagtuklas.Pinakamainam na gamitin ang reaction system na inirerekomenda ng quantitative PCR instrument para muling patakbuhin ang Real Time PCR experiment.
Mahinang repeatability ng quantitative values
1. Ang instrumento ay hindi gumagana.
Mungkahi: Maaaring may mga error sa pagitan ng bawat PCR hole ng instrumento, na nagreresulta sa hindi magandang reproducibility sa panahon ng pamamahala o pagtuklas ng temperatura.Mangyaring suriin ayon sa mga tagubilin ng kaukulang instrumento.
2.Ang sample na kadalisayan ay hindi maganda.
Rekomendasyon: Ang mga hindi malinis na sample ay hahantong sa hindi magandang reproducibility ng eksperimento, na kinabibilangan ng kadalisayan ng template at mga panimulang aklat.Pinakamainam na muling linisin ang template, at ang mga panimulang aklat ay pinakamahusay na dinadalisay ng SDS-PAGE.
3. Masyadong mahaba ang paghahanda at oras ng imbakan ng PCR system.
Mungkahi: Gamitin ang Real Time PCR system para sa eksperimento ng PCR kaagad pagkatapos ng paghahanda, at huwag itong iwanan nang masyadong mahaba.
4. Ang mga kondisyon ng PCR amplification ay hindi angkop, at ang primer sequence o konsentrasyon ay hindi wasto.
Mungkahi: kumpirmahin ang kawastuhan ng pagkakasunud-sunod ng panimulang aklat at ang panimulang aklat ay hindi nasira;kung ang signal ng amplification ay hindi maganda, subukang babaan ang temperatura ng pagsusubo at ayusin ang konsentrasyon ng primer nang naaangkop.
5. Ang PCR system ay hindi wasto, o ang sistema ay masyadong maliit.
Mungkahi: Ang sistema ng reaksyon ng PCR ay masyadong maliit ay magiging sanhi ng pagbaba ng katumpakan ng pagtuklas.Pinakamainam na gamitin ang reaction system na inirerekomenda ng quantitative PCR instrument para muling patakbuhin ang Real Time PCR experiment.
-
Animal Tissue Direct PCR kit (nang walang Sampling ...
-
Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (walang Sampol...
-
Animal Tissue DNA Isolation Kit Pagkuha ng DNA ...
-
Animal Total RNA Isolation Kit Kabuuang RNA Extract...
-
Cell Total RNA Isolation Kit Kabuuang RNA Isolation...
-
Pangkalahatang Plasmid Mini Kit Pangkalahatang Plasmid DNA Hal...
