Buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit Genomic DNA Extraction o Purifiaction Kit mula sa Buccal Swabs
Paglalarawan ng Kit:
Mabilis na linisin ang mataas na kalidad na genomic DNA mula sa mga sample ng buccal swab/FTA Card.
◮Walang kontaminasyon ng RNase:Ginagawang posible ng DNA-Only Column na ibinigay ng kit na alisin ang RNA mula sa genomic DNA nang hindi nagdaragdag ng RNase sa panahon ng eksperimento, na pumipigil sa laboratoryo na mahawa ng exogenous RNase.
◮Mabilis na bilis:Ang Foregene Protease ay may mas mataas na aktibidad kaysa sa mga katulad na protease, at mabilis na natutunaw ang mga sample ng tissue;ang operasyon ay simple, at ang genomic DNA extraction operation ay maaaring makumpleto sa loob ng 20-80 minuto.
◮Maginhawa:Ang centrifugation ay ginagawa sa room temperature, at hindi na kailangan ng 4°C low-temperature centrifugation o ethanol precipitation ng DNA.
◮Kaligtasan:Walang kinakailangang organic reagent extraction.
◮Mataas na kalidad:Ang nakuhang genomic DNA ay may malalaking fragment, walang RNA, walang RNase, at napakababang nilalaman ng ion, na maaaring matugunan ang mga kinakailangan ng iba't ibang mga eksperimento.
◮Micro-elution system:Maaari nitong pataasin ang konsentrasyon ng genomic DNA, na maginhawa para sa downstream detection o eksperimento.
Paglalarawan
Ang kit na ito ay nagbibigay ng mahusay at mabilis na paraan upang makakuha ng mataas na konsentrasyon ng genomic DNA mula sa buccal swab at FTA Card (mga batik ng dugo).Gamit ang aming kumpanya'Ang natatanging DNA-only na silica membrane spin column at formula, na sinamahan ng Foregene Protease, mataas ang konsentrasyon, de-kalidad na genomic DNA ay maaaring makuha sa loob ng 80 minuto.Ang espesyal na idinisenyong maliit na column ng purification ay nagbubuklod sa genomic na DNA, at ang DNA ay maaaring ma-eluted na may maliit na halaga (15μl) elution system upang mapataas ang konsentrasyon ng nakuhang genomic DNA, na maginhawa para sa downstream detection o eksperimento.Ang kit ay maaaring magproseso ng isa o higit pang mga sample sa isang pagkakataon, at ang proseso ng paglilinis ay hindi nangangailangan ng pagkuha ng mga organikong sangkap tulad ng phenol, chloroform, at matagal na isopropanol o ethanol precipitation, at ang operasyon ay simple at nakakatipid sa oras.
Mga pagtutukoy
50 Paghahanda
Mga bahagi ng kit
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Linear Acrylamide |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene Protease |
| DNA-Only Column |
| Mga tagubilin |
Mga tampok at kalamangan
-Walang kontaminasyon ng RNase: Ang DNA-Only Column na ibinigay ng kit ay ginagawang posible na alisin ang RNA mula sa genomic DNA nang hindi nagdaragdag ng RNase sa panahon ng eksperimento, na iniiwasan ang laboratoryo na ma-contaminate ng exogenous RNase.
-Mabilis na bilis: Ang Foregene Protease ay may mas mataas na aktibidad kaysa sa mga katulad na protease, mabilis na natutunaw ang mga sample;simpleng operasyon.
-Maginhawa: Ang sentripugasyon ay ginagawa sa temperatura ng silid, at hindi na kailangan ng 4°C na mababang temperatura na sentripugasyon o pag-ulan ng ethanol ng DNA.
-Kaligtasan: Walang kinakailangang organic reagent extraction.
-Mataas na kalidad: Ang nakuhang genomic DNA ay may malalaking fragment, walang RNA, walang RNase, at napakababang nilalaman ng ion, na maaaring matugunan ang mga kinakailangan ng iba't ibang mga eksperimento.
-Micro-elution system: Maaari nitong pataasin ang konsentrasyon ng genomic DNA, na maginhawa para sa downstream detection o eksperimento.
Application ng kit
Ito ay angkop para sa paglilinis ng genomic DNA mula sa mga sumusunod na sample: buccal swabs, FTA Card (mga mantsa ng dugo).
Imbakan at buhay ng istante
-Ang kit na ito ay maaaring maimbak sa loob ng 12 buwan sa ilalim ng mga tuyong kondisyon sa temperatura ng silid (15-25°C);kung kailangan itong itago sa mas mahabang panahon, maaari itong iimbak sa 2-8°C.
Tandaan: Kung nakaimbak sa mababang temperatura, ang solusyon ay madaling kapitan ng pag-ulan.Bago gamitin, siguraduhing ilagay ang solusyon sa kit sa temperatura ng silid sa loob ng ilang panahon.Kung kinakailangan, painitin ito sa isang 37°C na paliguan ng tubig sa loob ng 10 minuto upang matunaw ang namuo, at ihalo ito bago gamitin.
-Ang solusyon ng Foregene Protease ay may natatanging formula, na aktibo kapag nakaimbak sa temperatura ng silid nang mahabang panahon (3 buwan);ang aktibidad at katatagan nito ay magiging mas mahusay kapag nakaimbak sa 4°C, kaya inirerekomenda na iimbak ito sa 4°C, tandaan na huwag panatilihin ito sa -20°C.
Ang haligi ng paglilinis ay barado
Sa kit na ito, sa genomic DNA extraction operation, ang purification column ay direktang na-adsorbed sa sample na enzymatic lysis mixture na walang centrifugation step, at ang purification column ay maaaring ma-block dahil sa hindi kumpletong enzymization at mataas na lagkit ng sample.
Ang mga sumusunod na posibleng dahilan ay ang mga sumusunod:
1. Hindi kumpletong enzymatic digestion ng mga sample ng tissue.
Rekomendasyon: Ang sample na oras ng pagpoproseso ng Foregene Protease ay maaaring angkop na pahabain o ang supernatant ay maaaring kunin pagkatapos ng sentripugasyon sa 12,000 rpm (~13,400 × g) sa loob ng 5 min.
2. Labis na paggamit ng mga sample ng tissue o malalaking tissue.
Rekomendasyon: Pinakamainam na huwag lumampas sa 1 Buccal swab sa sample;kung ang sample ay masyadong malaki, dagdagan ang dosis ng Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 nang naaayon.
3. Masyadong mataas ang sample viscosity.
Rekomendasyon: Ang mga sample ay maaaring angkop na matunaw ng 10 mM ng Tris-HCl bago ang genomic DNA extraction.
4. Ang mga fragment ng blood card ay sinipsip.
Rekomendasyon: Ang transient centrifugation time ng step 6 ng blood spot (FTA Card) genomic extraction ay maaaring palawigin nang naaangkop.
Mababang ani o walang DNA
Kadalasan mayroong iba't ibang salik na nakakaapekto sa genomic DNA yield, kabilang ang sample na pinagmulan, sample na kondisyon ng storage, sample na paghahanda, pagmamanipula, atbp.
Ang genomic DNA ay hindi makukuha sa panahon ng pagkuha
Ang mga posibleng dahilan ay ang mga sumusunod:
1. Ang hindi wastong pag-iingat ng mga sample o pag-iimbak ng masyadong mahaba ay humahantong sa genomic DNA degradation.
Rekomendasyon: Ang mga oral swab ay dapat na bagong sample, at hindi ipinapayong gumamit ng mga preserved swab para sa genomic DNA extraction operations;dapat tiyakin ng mga sample ng blood spot na ang kalidad ay kwalipikado at ang oras ng pag-iimbak ay hindi dapat masyadong mahaba.
2. Ang masyadong maliit na paggamit ng tissue ay maaaring magresulta sa walang pagkuha ng kaukulang genomic DNA.
Rekomendasyon: Sundin ang buccal swab sampling na mga tagubilin sa operation guide, at punasan nang maraming beses hangga't maaari upang sapat na mga cell ang makakabit sa oral swab para sa genomic DNA extraction;para sa pagkuha ng sample ng blood spot, ang lugar ng paggupit ng dugo ay maaaring angkop na tumaas.
3. Ang Foregene Protease ay hindi wastong napreserba, na nagreresulta sa pagbaba sa aktibidad nito o hindi aktibo.
Rekomendasyon: Kumpirmahin ang mga kondisyon ng imbakan ng Foregene Protease o palitan ito ng bagong Foregene Protease para sa enzymatic na reaksyon.
4. Masyadong mahaba ang hindi wastong pag-iingat ng kit o oras ng pag-iimbak, na nagreresulta sa pagkabigo ng ilang bahagi sa kit.
Rekomendasyon: Bumili ng bagong Buccal swab DNA isolation kit para sa mga kaugnay na pamamaraan.
5. Ang Buffer WB ay hindi nagdaragdag ng ganap na ethanol.
Rekomendasyon: Kumpirmahin na ang buffer WB ay nagdaragdag ng tamang dami ng absolute ethanol.
6. Hindi wastong naidagdag ang eluent sa silicone film.
Rekomendasyon: Magdagdag ng 65 °C na pre-warmed eluent drop sa gitna ng silicone membrane at iwanan sa temperatura ng kuwarto ng 5 min upang mapataas ang kahusayan ng elution.
Naihiwalay ang genomic DNA na mababa ang ani
Ang mga sumusunod na posibleng dahilan ay ang mga sumusunod:
1. Ang hindi wastong pag-iingat ng mga sample o pag-iimbak ng masyadong mahaba ay humahantong sa genomic DNA degradation.
Rekomendasyon: Ang mga oral swab ay mas mainam na bagong sample, at ang mga napreserbang pamunas ay hindi dapat gamitin para sa genomic DNA extraction.
2. Kung ang dami ng sample ng tissue ay masyadong maliit, ang nakuhang genomic DNA content ay magiging mas kaunti.
Rekomendasyon: Sundin ang oral swab sampling na mga tagubilin sa operating guide, punasan nang maraming beses hangga't maaari upang sapat na mga cell ang makakabit sa oral swab para sa genomic DNA extraction.
3. Ang Foregene Protease ay hindi wastong napreserba, na nagreresulta sa pagbaba sa aktibidad nito o hindi aktibo.
Rekomendasyon: Kumpirmahin ang mga kondisyon ng imbakan ng Foregene Protease o palitan ito ng bagong Foregene Protease para sa enzymatic na reaksyon.
4. Mahusay na mga problema.
Rekomendasyon: Gamitin ang Buffer EB para sa elution;kung gumagamit ng ddH2O o iba pang eluent, kumpirmahin na ang pH ng eluate ay nasa pagitan ng 7.0-8.5.
5. Ang eluate ay hindi wastong idinagdag nang patak-patak.
Rekomendasyon: Magdagdag ng eluent drop sa gitna ng silicone membrane at mag-iwan sa temperatura ng kuwarto ng 5 min upang mapataas ang kahusayan ng elution.
6. Masyadong kaunti ang naiipon ng elution liquid.
Rekomendasyon: Gumamit ng eluent para sa genomic DNA elution gaya ng kinakailangan sa mga tagubilin, hindi bababa sa 15 μl.
Mababang kadalisayan ng genomic DNA na nakahiwalay
Ang mababang genomic DNA purity ay maaaring humantong sa pagkabigo o hindi kasiya-siyang resulta ng mga eksperimento sa ibaba ng agos, tulad ng: hindi mabubuksan ang mga enzyme, hindi makukuha ng PCR ang gene fragment ng interes, atbp.
Ang mga posibleng dahilan ay ang mga sumusunod:
1. Heteroprotein pollution, RNA pollution.
Pagsusuri: Hindi nahugasan ang column ng purification gamit ang Buffer PW;ang Buffer PW wash purification column ay hindi nahugasan gamit ang tamang centrifugal speed.
Rekomendasyon: Tiyakin na walang pag-ulan sa supernatant bago magdagdag ng ethanol;siguraduhing hugasan ang column ng purification ayon sa mga tagubilin, at hindi maaaring tanggalin ang hakbang na ito.
2. Impurity ion polusyon.
Pagsusuri: Ang buffer WB wash purification column ay tinanggal o nahugasan nang isang beses lang, na nagreresulta sa natitirang ionic na kontaminasyon.
Rekomendasyon: Siguraduhing hugasan ang Buffer WB 2 beses ayon sa itinuro upang maalis ang mga natitirang ions hangga't maaari.
3. Kontaminasyon ng RNA enzyme.
Pagsusuri: Ang mga dayuhang RNases ay idinagdag sa buffer;Hindi tama ang operasyon ng paghuhugas ng Buffer PW, na nagreresulta sa mga residue ng RNase, na nakakaapekto sa mga pang-eksperimentong operasyon ng RNA sa ibaba ng agos, gaya ng in vitro transcription.
Rekomendasyon: Ang mga foregene series na nucleic acid isolation kit ay maaaring mag-alis ng RNA nang walang karagdagang pagdaragdag ng RNase, kaya ang buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit ay hindi kailangang magdagdag ng RNase;siguraduhing sundin ang mga tagubilin para sa Buffer PW washing purification column, at ang hakbang na ito ay hindi maaaring tanggalin.
4. Nalalabi sa ethanol.
Pagsusuri: Ang Buffer WB ay hindi nagsagawa ng empty tube centrifugation pagkatapos hugasan ang purification column.
Rekomendasyon: Isagawa ang tamang operasyon ng centrifugation na walang laman na tubo ayon sa mga tagubilin.
5. Iba pang polusyon sa karumihan.
Pagsusuri: Ang mga naka-save na sample o mga espesyal na sample ay hindi ginagamot.
Rekomendasyon: Masusing pretreat ang sample gaya ng itinuro.
