Escherichia coli O157:H7 Nucleic Acid Detection Kit (PCR Fluorescent Probe Method)
Paglalarawan ng Kit:
Pusa.Hindi.FP102
Ito ay ginagamit para sa mabilis na pagtuklas at pag-screen ng E. coli O157:H7 sa pagkain, feed, mga sample ng tubig at mga sample ng kapaligiran.
Mga paglalarawan
Ito ay ginagamit para sa mabilis na pagtuklas at pag-screen ng E. coli O157:H7 sa pagkain, feed, mga sample ng tubig at mga sample ng kapaligiran.
[Prinsipyo ng pagsubok]Ayon sa prinsipyo ng fluorescent PCR technology, ang mga partikular na primer at Taqman probes ay idinisenyo para sa partikular na gene ng Escherichia coli O157: H7, at nakita ng fluorescent PCR instrument, upang mapagtanto ang pagtuklas ng Escherichia coli O157: H7 Qualitative detection ng DNA.
Mga Nilalaman ng Kit
Tandaan: Hindi kasama ang ROX channel probe.
| Cmga kalaban | Pagtutukoy | Quantity |
| Buffer A | tubo | 1 |
| Buffer B | tubo | 1 |
| Positibong kontrol | tubo | 1 |
| Negatibong kontrol | tubo | 1 |
Inaasahang Paggamit
Ito ay ginagamit para sa mabilis na pagtuklas at pag-screen ng E. coli O157:H7 sa pagkain, feed, mga sample ng tubig at mga sample ng kapaligiran.
Mga Kundisyon sa Imbakan At Petsa ng Pag-expire
Mag-imbak sa -20 ℃ sa madilim at iwasan ang paulit-ulit na pagyeyelo at lasaw.
Ang panahon ng bisa ay 12buwan, at ang petsa ng produksyon ay ipinapakita sa panlabas na packaging.
Mga Instrumento at Nagagamit
Fluorescent quantitative PCR instrument, pipette gun at mga tip sa pagtutugma, vortex shaker, mini centrifuge.
Paggamit
1. Pagproseso ng Sample
1.1 Uri ng sample: Ang kit na ito ay angkop para sa pagkain, feed, mga sample ng tubig at iba pang mga sample na pinaghihinalaang kontaminado ng Escherichia coli O157:H7.Para sa mga produktong deep-processed na karne, inumin at iba pang substance na naglalaman ng mga pigment, kailangan nilang banlawan upang maiwasang maapektuhan ang pagkolekta ng fluorescence signal.
1.2 Pagproseso ng sample: Sumangguni sa "GB 4789.10-2016 Food Safety National Standard Food Microbiological Examination ng Escherichia coli O157: H7 Test" para sa paghahanda ng sample, kultura ng pagpapayaman at paghihiwalay ng Escherichia coli O157: H7.
- Npagkuha ng ucleic acid
Kumuha ng 20 mL ng enrichment solution sa 1.5 mL centrifuge tube, magdagdag ng 200 μL ng microbial lysate (karagdagang kit ang kinakailangan), vortex sa loob ng 30 segundo, centrifuge sandali, at itabi.
Pangungusap: Ang pagkuha ng nucleic acid mula sa lysate ay dapat makumpleto sa loob ng 10 minuto, at hindi maiimbak ng mahabang panahon.
3. Pagpapalakas ng Nucleic Acid
3.1 I-on ang fluorescent quantitative PCR instrument para magamit.
Buffer A at Buffer B mula sa kit , tunawin ang mga ito nang lubusan, at i-centrifuge saglit.Magdagdag ng 18 μL Buffer A at 2 μL Buffer B sa bawat PCR reaction tube.Pagkatapos ay magdagdag ng 5 mL bawat isa sa negatibong kontrol, nakuhang nucleic acid, at positibong kontrol sa mga tubo ng reaksyon ng PCR, takpan ang mga tubo, at i-centrifuge saglit.
3.3 Ilipat ang PCR reaction tube sa isang fluorescent PCR machine, at gamitin ang mga sumusunod na pamamaraan para magsagawa ng amplification experiments: pumili ng 25 mL para sa reaction system, mangolekta ng fluorescence signal sa 60°C para sa bawat cycle, at piliin ang FAM para sa detection channel.
| Hakbang | Programa | Bilang ng mga cycle |
| 1 | 37℃ 5min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60℃ 30s (kumolekta ng fluorescence) |
Mga gabay para sa pagsusuri ng mga problema
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Walang RNA ang maaaring makuha o mababa ang ani ng nucleic acid
Karaniwang maraming salik ang nakakaapekto sa kahusayan sa pagbawi, gaya ng: sample na nilalaman ng RNA, paraan ng pagpapatakbo, dami ng elution, atbp.
Pagsusuri ng mga karaniwang sanhi:
1. Ice bath o low-temperature (4 ° C) centrifugation sa panahon ng operasyon.
Mungkahi: Operasyon sa temperatura ng silid (15-25 ° C), hindi kailanman ice bath at low temperature centrifuge.
2. Hindi wastong pag-iimbak ng sample o pag-iimbak ng sample nang masyadong mahaba.
Mungkahi: Mag-imbak ng mga sample sa -80 ° C o mag-freeze sa likidong nitrogen, at iwasan ang paulit-ulit na paggamit ng freeze-thaw;subukang gumamit ng mga bagong nakolektang sample para sa RNA extraction.
3.Hindi sapat na sample lysis
Rekomendasyon: Pakitiyak na ang sample at ang gumaganang solusyon (Linear Acrylamide) ay lubusang pinaghalo at na-incubate sa loob ng 10 min sa temperatura ng silid (15-25 ° C)
4.Maling naidagdag ang eluent
Rekomendasyon: Tiyaking idinaragdag ang RNase-Free ddH2O sa gitna ng lamad ng column ng purification
5. Hindi wastong dami ng anhydrous ethanol sa Buffer viRW2
Mungkahi: Mangyaring sundin ang mga tagubilin, idagdag ang tamang dami ng anhydrous ethanol sa Buffer viRW2 at ihalo nang mabuti ang mga ito bago gamitin ang kit.
6. Hindi wastong paggamit ng sample.
Mungkahi: 200µl ng sample bawat 500μl ng Buffer viRL.Ang sobrang dami ng sample ay magreresulta sa pagbawas ng rate ng pagkuha ng RNA.
7. Hindi wastong dami ng elution o hindi kumpletong elution.
Mungkahi: Ang eluent volume ng purification column ay 30-50μl;kung hindi kasiya-siya ang elution effect, inirerekomendang magdagdag ng pre-heated RNase-Free ddH2O at pahabain ang oras ng paglalagay sa temperatura ng silid, tulad ng 5-10min
8. Ang column ng purification ay may nalalabi na ethanol pagkatapos banlawan sa Buffer viRW2.
Mungkahi: Kung nananatili pa rin ang ethanol pagkatapos banlawan sa Buffer viRW2 at empty-tube centrifugation sa loob ng 2min, ang purification column ay maaaring iwan sa room temperature ng 5min pagkatapos ng empty-tube centrifugation upang ganap na maalis ang natitirang ethanol.
Ang pagkasira ng purified RNA molecules
Ang kalidad ng purified RNA ay nauugnay sa mga salik tulad ng sample storage, RNase contamination, at operasyon.
Pagsusuri ng mga karaniwang sanhi:
1. Ang mga nakolektang sample ay hindi na-save sa oras.
Mungkahi: Kung ang sample ay hindi ginamit sa oras pagkatapos ng koleksyon, mangyaring itabi ito kaagad sa -80 ℃ o liquid nitrogen.Para sa pagkuha ng mga molekula ng RNA, subukang gumamit ng mga bagong nakolektang sample hangga't maaari.
2. Ang mga nakolektang sample ay nagyeyelo at natunaw nang paulit-ulit.
Mungkahi: Iwasan ang paulit-ulit na pagyeyelo at lasaw (hindi hihigit sa isang beses) sa panahon ng pagkolekta at pag-iimbak ng sample, kung hindi ay bababa ang ani ng nucleic acid.
3. Ang RNase ay ipinakilala sa operating room o walang mga disposable gloves, mask, atbp. ang isinuot.
Mungkahi: Ang pagkuha ng RNA molecules eksperimento ay pinakamahusay na ginanap sa isang hiwalay na RNA operation room, at ang experimental table ay nililinis bago ang eksperimento.Magsuot ng mga disposable gloves at mask sa panahon ng eksperimento upang maiwasan ang pagkasira ng RNA na dulot ng pagpapakilala ng RNase.
4. Ang reagent ay kontaminado ng RNase habang ginagamit.
Mungkahi: Palitan ng bagong Viral RNA Isolation Kit para sa mga kaugnay na eksperimento.
5. Ang kontaminasyon ng RNase ng mga centrifuge tube, pipette tip, atbp. Mungkahi: Siguraduhin na ang centrifuge tubes, pipette tip, at pipette ay lahat ay RNase-Free.
Naapektuhan ng mga purified RNA molecule ang mga eksperimento sa ibaba ng agos
Ang mga molekula ng RNA na pinadalisay ng column ng purification ay makakaapekto sa mga eksperimento sa ibaba ng agos kung mayroong masyadong maraming salt ions o protina, tulad ng: reverse transcription, Northern Blot, atbp.
1. May mga natitirang salt ions sa mga eluted RNA molecules.
Rekomendasyon: Siguraduhin na ang tamang dami ng anhydrous ethanol ay naidagdag sa Buffer viRW2, at hugasan ang purification column nang dalawang beses ayon sa tamang centrifugation speed sa mga tagubilin sa pagpapatakbo; Kung may natitira pang mga salt ions, maaari mong idagdag ang Buffer viRW2 sa purification column, at iwanan ito sa temperatura ng kuwarto sa loob ng 5min.Pagkatapos ay magsagawa ng centrifugation upang alisin ang kontaminasyon ng mga ion ng asin sa pinakamaraming lawak
2. May mga natitirang ethanol sa eluted RNA molecules
Mungkahi: sa sandaling makumpirma na ang mga column ng purification ay nahugasan na ng Buffer viRW2, magsagawa ng empty-tube centrifugation ayon sa centrifugal speed sa mga tagubilin sa pagpapatakbo.Kung may natitira pang ethanol, maaari itong iwanan ng 5 minuto sa temperatura ng silid pagkatapos ng sentrifugasyon na walang laman ang tubo upang maalis ang natitirang ethanol sa pinakamalawak na lawak.
Mga Manwal ng Pagtuturo:
Viral RNA Isolation Kit Instruction Manual
