Foreasy HS Taq DNA Polymerase
Paglalarawan ng Kit:
◮High specificity: Ang enzyme na may mataas na hot-start na aktibidad.
◮Mabilis na Pagpapalakas: 10 sec/kb.
◮Mataas na kakayahang umangkop sa template : maaaring magamit upang mahusay na palakasin ang MataasGChalagaatiba't ibang mahirap-palakasin na template ng DNA.
◮Malakas na katapatan: Ang katapatan ay 6 na besesof ordinaryong Taq Enzyme.
Paglalarawan
Ang Foreasy HS Taq DNA Polymerase ay isang bagong Taq enzyme na ipinahayag sa Escherichia coli engineering bacteria sa pamamagitan ng teknolohiya ng gene recombination.Matapos ang enzyme ay tratuhin ng isang espesyal na proseso, ito'Ang aktibidad ay pinipigilan bago ang thermal activation, at sa gayon ay pinipigilan ang hindi tiyak na amplification na dulot ng hindi tiyak na pagsusubo ng mga primer o primer dimer sa ilalim ng mababang kondisyon ng temperatura.Ang produktong ito ay angkop para sa lubos na tiyak na PCR Reaction, M ultiple x PCR , mataas na GC na nilalaman (> 60%) ,kasamapangalawang istrakturao ibamalakas na background genomicsamplification at malakihang genomicspagtukoy ng amplification.Ang enzyme ay may 5' → 3' DNA polymerase activity at 5' → 3' exonuclease activity, ngunit walang 3' → 5' exonuclease activity.
Mga bahagi ng kit
| Component | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 5000 U (1 mL) | 50 KU (10 mL) | 500 KU (100 mL) |
| 2× Buffer ng Reaksyon ng Taq | 25mL ×5 | 250 mL ×5 | 500 mL × 25 |
Mga tampok at kalamangan
- Mataas na pagtitiyak: Ang enzyme na may mataas na aktibidad sa pagsisimula.
- Mabilis na Pagpapalakas: 10 seg/kb.
- Mataas na kakayahang umangkop sa template : maaaring magamit upang mahusay na palakasin ang MataasGChalagaatiba't ibang mahirap-palakasin na template ng DNA.
- Malakas na katapatan: Ang katapatan ay 6 na besesof ordinaryong Taq Enzyme.
Application ng kit
- Iba't ibang PCR/qPCR System at direktang PCR system
- PCR Amplified DNA Fragment
- marka ng DNA
- Pagsunud-sunod ng DNA
- PCR plus A tail
Kahulugan ng Aktibidad
1U : Ang dami ng enzyme na kinakailangan upang maisama ang 10 nmol ngDNAsa acid-insoluble matter gamit ang activated salmon sperm DNA bilang template / primer, 74 °C, 30 minuto.
Kondisyon ng Reaksyon
| Temperatura | Oras ng Reaksyon | Oras ng pag-ikot |
| 37°C | 5 min | 1 |
| 94°C | 5 min | 1 |
| 94°C | 10 Seg | 40 |
| 60°C | 10 Seg |
Tandaan:Para sa 10 µL at 20 µL system, magdagdag ng pantay na dami ng mineral oil kung walang heat lid ang thermal cycler .
Ang mga kondisyon ng reaksyon ng PCR ay nag-iiba depende sa mga kondisyon ng istruktura ng mga template, primer, at mga katulad nito.Sa partikular na operasyon, kinakailangang idisenyo ang pinakamainam na kondisyon ng reaksyon, kabilang ang temperatura ng pagsusubo, oras ng extension, atbp., ayon sa mga partikular na kondisyon tulad ng uri ng template, ang laki ng target na fragment, ang base sequence ng amplified fragment, at ang GC na nilalaman at haba ng primer.
Imbakan
-20 ± 5 °C sa loob ng 2 taon o sa -80 °C para sa pangmatagalang imbakan.
Walang amplification signal
1. Ang Taq DNA Polymerase sa kit ay nawawalan ng aktibidad dahil sa hindi tamang pag-iimbak o pag-expire ng kit.
Rekomendasyon: Kumpirmahin ang mga kondisyon ng imbakan ng kit;muling magdagdag ng naaangkop na halaga ng Taq DNA Polymerase sa PCR system o bumili ng bagong Real Time PCR Kit para sa mga kaugnay na eksperimento.
2. Mayroong maraming mga inhibitor ng Taq DNA Polymerase sa template ng DNA.
Mungkahi: I-repurify ang template o bawasan ang dami ng template na ginamit.
3.Ang konsentrasyon ng Mg2+ ay hindi angkop.
Rekomendasyon: Ang konsentrasyon ng Mg2+ ng 2× Real PCR Mix na ibinibigay namin ay 3.5mM.Gayunpaman, para sa ilang espesyal na panimulang aklat at template, ang konsentrasyon ng Mg2+ ay maaaring mas mataas.Samakatuwid, maaari mong direktang idagdag ang MgCl2 upang ma-optimize ang konsentrasyon ng Mg2+.Inirerekomenda na taasan ang Mg2+ 0.5mM sa bawat oras para sa pag-optimize.
4. Ang mga kondisyon ng PCR amplification ay hindi angkop, at ang primer sequence o konsentrasyon ay hindi wasto.
Mungkahi: kumpirmahin ang kawastuhan ng pagkakasunud-sunod ng panimulang aklat at ang panimulang aklat ay hindi nasira;kung ang signal ng amplification ay hindi maganda, subukang babaan ang temperatura ng pagsusubo at ayusin ang konsentrasyon ng primer nang naaangkop.
5.Ang halaga ng template ay masyadong maliit o sobra.
Rekomendasyon: Magsagawa ng template linearization gradient dilution, at piliin ang konsentrasyon ng template na may pinakamagandang PCR effect para sa Real Time PCR na eksperimento.
Masyadong mataas ang halaga ng fluorescence ng NTC
1.Reagent contamination sanhi sa panahon ng operasyon.
Rekomendasyon: Palitan ng mga bagong reagents para sa Real Time PCR na mga eksperimento.
2.Naganap ang kontaminasyon sa panahon ng paghahanda ng PCR reaction system.
Rekomendasyon: Magsagawa ng mga kinakailangang hakbang sa proteksyon sa panahon ng operasyon, tulad ng: pagsusuot ng latex gloves, paggamit ng pipette tip na may filter, atbp.
3. Ang mga panimulang aklat ay nasisira, at ang pagkasira ng mga panimulang aklat ay magdudulot ng hindi tiyak na pagpapalakas.
Mungkahi: Gumamit ng SDS-PAGE electrophoresis upang matukoy kung ang mga primer ay nasira, at palitan ang mga ito ng mga bagong panimulang aklat para sa Real Time PCR na mga eksperimento.
Primer dimer o non-specific na amplification
1.Ang konsentrasyon ng Mg2+ ay hindi angkop.
Rekomendasyon: Ang konsentrasyon ng Mg2+ ng 2× Real PCR EasyTM Mix na ibinibigay namin ay 3.5 mM.Gayunpaman, para sa ilang espesyal na panimulang aklat at template, ang konsentrasyon ng Mg2+ ay maaaring mas mataas.Samakatuwid, maaari mong direktang idagdag ang MgCl2 upang ma-optimize ang konsentrasyon ng Mg2+.Inirerekomenda na taasan ang Mg2+ 0.5mM sa bawat oras para sa pag-optimize.
2.Ang PCR annealing temperature ay masyadong mababa.
Mungkahi: Taasan ang PCR annealing temperature ng 1 ℃ o 2 ℃ sa bawat pagkakataon.
3.Ang produkto ng PCR ay masyadong mahaba.
Rekomendasyon: Ang haba ng produktong Real Time PCR ay dapat nasa pagitan ng 100-150bp, hindi hihigit sa 500bp.
4. Ang mga panimulang aklat ay nasira, at ang pagkasira ng mga panimulang aklat ay hahantong sa paglitaw ng tiyak na pagpapalakas.
Mungkahi: Gumamit ng SDS-PAGE electrophoresis upang matukoy kung ang mga primer ay nasira, at palitan ang mga ito ng mga bagong panimulang aklat para sa Real Time PCR na mga eksperimento.
5. Ang PCR system ay hindi wasto, o ang sistema ay masyadong maliit.
Mungkahi: Ang sistema ng reaksyon ng PCR ay masyadong maliit ay magiging sanhi ng pagbaba ng katumpakan ng pagtuklas.Pinakamainam na gamitin ang reaction system na inirerekomenda ng quantitative PCR instrument para muling patakbuhin ang Real Time PCR experiment.
Mahinang repeatability ng quantitative values
1. Ang instrumento ay hindi gumagana.
Mungkahi: Maaaring may mga error sa pagitan ng bawat PCR hole ng instrumento, na nagreresulta sa hindi magandang reproducibility sa panahon ng pamamahala o pagtuklas ng temperatura.Mangyaring suriin ayon sa mga tagubilin ng kaukulang instrumento.
2.Ang sample na kadalisayan ay hindi maganda.
Rekomendasyon: Ang mga hindi malinis na sample ay hahantong sa hindi magandang reproducibility ng eksperimento, na kinabibilangan ng kadalisayan ng template at mga panimulang aklat.Pinakamainam na muling linisin ang template, at ang mga panimulang aklat ay pinakamahusay na dinadalisay ng SDS-PAGE.
3. Masyadong mahaba ang paghahanda at oras ng imbakan ng PCR system.
Mungkahi: Gamitin ang Real Time PCR system para sa eksperimento ng PCR kaagad pagkatapos ng paghahanda, at huwag itong iwanan nang masyadong mahaba.
4. Ang mga kondisyon ng PCR amplification ay hindi angkop, at ang primer sequence o konsentrasyon ay hindi wasto.
Mungkahi: kumpirmahin ang kawastuhan ng pagkakasunud-sunod ng panimulang aklat at ang panimulang aklat ay hindi nasira;kung ang signal ng amplification ay hindi maganda, subukang babaan ang temperatura ng pagsusubo at ayusin ang konsentrasyon ng primer nang naaangkop.
5. Ang PCR system ay hindi wasto, o ang sistema ay masyadong maliit.
Mungkahi: Ang sistema ng reaksyon ng PCR ay masyadong maliit ay magiging sanhi ng pagbaba ng katumpakan ng pagtuklas.Pinakamainam na gamitin ang reaction system na inirerekomenda ng quantitative PCR instrument para muling patakbuhin ang Real Time PCR experiment.
-
Animal Tissue Direct PCR kit (nang walang Sampling ...
-
Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (walang Sampol...
-
Animal Tissue DNA Isolation Kit Pagkuha ng DNA ...
-
Animal Total RNA Isolation Kit Kabuuang RNA Extract...
-
Cell Total RNA Isolation Kit Kabuuang RNA Isolation...
-
Pangkalahatang Plasmid Mini Kit Pangkalahatang Plasmid DNA Hal...
