Foreasy Taq DNA Polymerase
Paglalarawan ng Kit:
◮Mataas na pagtitiyak: Ang enzyme ay may partikular na aktibidad ng pagsisimula.
◮Mabilis na Pagpapalakas: 10 sec/kb.
◮Highly adaptable na template: maaaring gamitin upang mahusay na palakihin ang GC High value, iba't ibang mahirap-palakasin na template ng DNA.
◮Malakas na katapatan: ordinaryong Taq Enzyme 6 beses.
◮Malakas na thermal stability: Maaari itong ilagay sa 37 °C sa loob ng isang linggo at mapanatili ang higit sa 90% na aktibidad.
Paglalarawan
Ang Foreasy Taq DNA Polymerase ay isang bagong Taq enzyme na ipinahayag sa Escherichia coli engineering bacteria sa pamamagitan ng teknolohiya ng gene recombination.Ang enzyme mismo ay may isang tiyak na aktibidad ng pagsisimula at maaaring gamitin para sa maginoo na PCR at qPCR;mayroon itong 5'→3' DNA polymerase activity at 5'→3' exonuclease activity, ngunit walang 3'→5' exonuclease activity.
Mga bahagi ng kit
| Component | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
| Foreasy Taq DNA Polymerase(5 U/μL) | 5000 U (1 mL) | 50 KU (10 mL) | 500 KU (100 mL) |
| 2× Buffer ng Reaksyon ng Taq | 25 mL ×5 | 250 mL ×5 | 500 mL ×25 |
Mga tampok at kalamangan
- Mataas na pagtitiyak: Ang enzyme ay may partikular na aktibidad ng pagsisimula.
- Mabilis na Pagpapalakas: 10 seg/kb .
- Highly adaptable na template: maaaring gamitin para mahusay na palakihin ang GC High value, iba't ibang mahirap-palakasin na template ng DNA.
- Malakas na katapatan: ordinaryong Taq Enzyme 6 na beses.
- Malakas na thermal stability: Maaari itong ilagay sa 37 °C sa loob ng isang linggo at mapanatili ang higit sa 90% na aktibidad
Application ng kit
Iba't ibang PCR/qPCR system at direktang PCR system
PCR amplification ng mga fragment ng DNA
Pag-label ng DNA
DNA sequencing
PCR A-tailed
U Depinisyon
1U: Ang dami ng enzyme na kinakailangan upang maisama ang 10 nmol ng deoxynucleotides sa acid-inoluble matter gamit ang activated salmon sperm DNA bilang template/primer sa loob ng 30 minuto sa 74°C.
Kondisyon ng Reaksyon
| Temperatura | Oras | Ikot |
| 37°C | 5mins | 1 |
| 94°C | 5mins | 1 |
| 94°C | 10 Seg | 35 |
| 60°C | 10 Seg | |
| 72°C | 20 segundo/kb | |
| 72°C | 2mins | 1 |
Imbakan
-20 ± 5 °C sa loob ng 2 taon o sa -80 °C para sa pangmatagalang imbakan.
Walang amplification signal
1. Ang Taq DNA Polymerase sa kit ay nawawalan ng aktibidad dahil sa hindi tamang pag-iimbak o pag-expire ng kit.
Rekomendasyon: Kumpirmahin ang mga kondisyon ng imbakan ng kit;muling magdagdag ng naaangkop na halaga ng Taq DNA Polymerase sa PCR system o bumili ng bagong Real Time PCR Kit para sa mga kaugnay na eksperimento.
2. Mayroong maraming mga inhibitor ng Taq DNA Polymerase sa template ng DNA.
Mungkahi: I-repurify ang template o bawasan ang dami ng template na ginamit.
3.Ang konsentrasyon ng Mg2+ ay hindi angkop.
Rekomendasyon: Ang konsentrasyon ng Mg2+ ng 2× Real PCR Mix na ibinibigay namin ay 3.5mM.Gayunpaman, para sa ilang espesyal na panimulang aklat at template, ang konsentrasyon ng Mg2+ ay maaaring mas mataas.Samakatuwid, maaari mong direktang idagdag ang MgCl2 upang ma-optimize ang konsentrasyon ng Mg2+.Inirerekomenda na taasan ang Mg2+ 0.5mM sa bawat oras para sa pag-optimize.
4. Ang mga kondisyon ng PCR amplification ay hindi angkop, at ang primer sequence o konsentrasyon ay hindi wasto.
Mungkahi: kumpirmahin ang kawastuhan ng pagkakasunud-sunod ng panimulang aklat at ang panimulang aklat ay hindi nasira;kung ang signal ng amplification ay hindi maganda, subukang babaan ang temperatura ng pagsusubo at ayusin ang konsentrasyon ng primer nang naaangkop.
5.Ang halaga ng template ay masyadong maliit o sobra.
Rekomendasyon: Magsagawa ng template linearization gradient dilution, at piliin ang konsentrasyon ng template na may pinakamagandang PCR effect para sa Real Time PCR na eksperimento.
Masyadong mataas ang halaga ng fluorescence ng NTC
1.Reagent contamination sanhi sa panahon ng operasyon.
Rekomendasyon: Palitan ng mga bagong reagents para sa Real Time PCR na mga eksperimento.
2.Naganap ang kontaminasyon sa panahon ng paghahanda ng PCR reaction system.
Rekomendasyon: Magsagawa ng mga kinakailangang hakbang sa proteksyon sa panahon ng operasyon, tulad ng: pagsusuot ng latex gloves, paggamit ng pipette tip na may filter, atbp.
3. Ang mga panimulang aklat ay nasisira, at ang pagkasira ng mga panimulang aklat ay magdudulot ng hindi tiyak na pagpapalakas.
Mungkahi: Gumamit ng SDS-PAGE electrophoresis upang matukoy kung ang mga primer ay nasira, at palitan ang mga ito ng mga bagong panimulang aklat para sa Real Time PCR na mga eksperimento.
Primer dimer o non-specific na amplification
1.Ang konsentrasyon ng Mg2+ ay hindi angkop.
Rekomendasyon: Ang konsentrasyon ng Mg2+ ng 2× Real PCR EasyTM Mix na ibinibigay namin ay 3.5 mM.Gayunpaman, para sa ilang espesyal na panimulang aklat at template, ang konsentrasyon ng Mg2+ ay maaaring mas mataas.Samakatuwid, maaari mong direktang idagdag ang MgCl2 upang ma-optimize ang konsentrasyon ng Mg2+.Inirerekomenda na taasan ang Mg2+ 0.5mM sa bawat oras para sa pag-optimize.
2.Ang PCR annealing temperature ay masyadong mababa.
Mungkahi: Taasan ang PCR annealing temperature ng 1 ℃ o 2 ℃ sa bawat pagkakataon.
3.Ang produkto ng PCR ay masyadong mahaba.
Rekomendasyon: Ang haba ng produktong Real Time PCR ay dapat nasa pagitan ng 100-150bp, hindi hihigit sa 500bp.
4. Ang mga panimulang aklat ay nasira, at ang pagkasira ng mga panimulang aklat ay hahantong sa paglitaw ng tiyak na pagpapalakas.
Mungkahi: Gumamit ng SDS-PAGE electrophoresis upang matukoy kung ang mga primer ay nasira, at palitan ang mga ito ng mga bagong panimulang aklat para sa Real Time PCR na mga eksperimento.
5. Ang PCR system ay hindi wasto, o ang sistema ay masyadong maliit.
Mungkahi: Ang sistema ng reaksyon ng PCR ay masyadong maliit ay magiging sanhi ng pagbaba ng katumpakan ng pagtuklas.Pinakamainam na gamitin ang reaction system na inirerekomenda ng quantitative PCR instrument para muling patakbuhin ang Real Time PCR experiment.
Mahinang repeatability ng quantitative values
1. Ang instrumento ay hindi gumagana.
Mungkahi: Maaaring may mga error sa pagitan ng bawat PCR hole ng instrumento, na nagreresulta sa hindi magandang reproducibility sa panahon ng pamamahala o pagtuklas ng temperatura.Mangyaring suriin ayon sa mga tagubilin ng kaukulang instrumento.
2.Ang sample na kadalisayan ay hindi maganda.
Rekomendasyon: Ang mga hindi malinis na sample ay hahantong sa hindi magandang reproducibility ng eksperimento, na kinabibilangan ng kadalisayan ng template at mga panimulang aklat.Pinakamainam na muling linisin ang template, at ang mga panimulang aklat ay pinakamahusay na dinadalisay ng SDS-PAGE.
3. Masyadong mahaba ang paghahanda at oras ng imbakan ng PCR system.
Mungkahi: Gamitin ang Real Time PCR system para sa eksperimento ng PCR kaagad pagkatapos ng paghahanda, at huwag itong iwanan nang masyadong mahaba.
4. Ang mga kondisyon ng PCR amplification ay hindi angkop, at ang primer sequence o konsentrasyon ay hindi wasto.
Mungkahi: kumpirmahin ang kawastuhan ng pagkakasunud-sunod ng panimulang aklat at ang panimulang aklat ay hindi nasira;kung ang signal ng amplification ay hindi maganda, subukang babaan ang temperatura ng pagsusubo at ayusin ang konsentrasyon ng primer nang naaangkop.
5. Ang PCR system ay hindi wasto, o ang sistema ay masyadong maliit.
Mungkahi: Ang sistema ng reaksyon ng PCR ay masyadong maliit ay magiging sanhi ng pagbaba ng katumpakan ng pagtuklas.Pinakamainam na gamitin ang reaction system na inirerekomenda ng quantitative PCR instrument para muling patakbuhin ang Real Time PCR experiment.
-
Animal Tissue Direct PCR kit (nang walang Sampling ...
-
Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (walang Sampol...
-
Animal Tissue DNA Isolation Kit Pagkuha ng DNA ...
-
Animal Total RNA Isolation Kit Kabuuang RNA Extract...
-
Cell Total RNA Isolation Kit Kabuuang RNA Isolation...
-
Pangkalahatang Plasmid Mini Kit Pangkalahatang Plasmid DNA Hal...
