Direktang RT-qPCR Kit III
Paglalarawan ng Kit:
◮Direktang RT-qPCR Kit, gamit ang Foreasy Reverse Transcriptase at Foreasy HS Taq DNA Polymerase na binuo ni Foregene, na may natatanging buffer ng reaksyon, ang kit na ito ay may malakas na resistensya at compatibility, at maaari nitong direktang subukan ang reaksyon gamit ang Foregene Lysis system bilang template.Maaaring mag-apply ang kit na ito para sa COVID-19 nucleic acid detection kit at iba pang pathogenic bacteria na pagbuo ng nucleic acid detection kit.
Paglalarawan
Ang Direct RT-qPCR Kit ay nagbibigay ng hiwalay na nakabalot na RT-qPCR buffer (na may Foreasy HS Taq DNA polymerase mixed) at mataas ang kahusayanForeasy Reverse Transcriptase(MMLV),ginagawa itong maginhawa para sa paglikha ng mga back-end kit at pagsasaayos ng system，sa loob ng simpleng pag-verify.
Direktang RT-qPCR Kit, gamit ang Foreasy Reverse Transcriptase at Foreasy HS Taq DNA Polymerase na binuo ni Foregene, na may natatanging buffer ng reaksyon, ang kit na ito ay may malakas na resistensya at compatibility, at maaari nitong direktang subukan ang reaksyon gamit ang Foregene Lysis system bilang template.Maaaring mag-apply ang kit na ito para sa COVID-19 nucleic acid detection kit at iba pang pathogenic bacteria na pagbuo ng nucleic acid detection kit.
Ang kit na ito ay maaaring direktang maging bahagi ng produkto ng IVD, gamit ang madali at mabilis.Kailangan lang nito ng madaling pag-verify, nang hindi na muling umuunlad.
Mga pagtutukoy
500T, 50,000T
Mga bahagi ng kit
| Mga nilalaman ng kit (20 μL na sistema ng reaksyon) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 T | 50,000 T | |
| Foreasy Reverse Transcriptase(200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 mL×5 |
| 2× Direktang qPCRMix-Taqman | 1 mL ×5 | 500 ML×1 |
| Pagtuturo | 1 | 1 |
Mga Hakbang sa Pagpapatakbo
A: Maghanda ng template at reagent
1. Maghanda ng inihandang template ng RNA (Inirerekomenda na gumamit ng Foregene Total RNA Isolation Kit series kit para i-extract at linisin ang template ng RNA) o sample ng cracking na produkto (Inirerekomendang gumamit ng Foregene Lysis system), mga partikular na primer(10 μM) at iba pang nauugnay na consumable, instrumento.
2. Ilagay ang 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O at 20× ROX Reference Dye (kung kinakailangan) sa kahon na may yelo, na ginagawang natural na matunaw ang mga ito, at malumanay na halo-halong.
B: Maghanda ng RT-qPCR system
Kunin ang kalahati ng volume ng reaction buffer ng reaction system (halimbawa, kung ang volume ng system ay 20 μL, kailangan nitong makakuha ng 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer). Para sakatumbas na dami ng enzyme, iminumungkahi namin iyonM-MLV：10-30 U/20 μL na sistema ng reaksyon,TaqDNA polymerase：1-2 U/20 μL na sistema ng reaksyonito ang aming mungkahi, dapat mong subukan at ayusin ito), magdagdag ng template ng RNA, mga partikular na primer at probe, at magdagdag ng RNase-Free ddH2O hanggang 20 μL.Ang tiyak na paghahanda ng sistema ng reaksyon ng RT-qPCR ay maaaring i-refer sa sumusunod na talahanayan 1.
Talahanayan 1 : Maghanda ng RT-qPCR system
| Component | Dami | Panghuling konsentrasyon |
| 2× Direktang RT-qPCR Buffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase(MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| Forward Primer(10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| Baliktad na Primer(10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| Probe(4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Template(RNA o Lysate) | X μL | |
| 20× ROX Reference Dye | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| Kabuuang Dami | 20 μL |
Tandaan: Ang Forward Primer at Reverse Primer ay mga partikular na primer ng target na gene.Ang sistema ng qPCR ay maaaring iakma ayon sa mga praktikal na eksperimentong modelo at PCR.Inirerekomenda namin ang 400nM para sa panghuling konsentrasyon ng karamihan sa mga primer.Ayusin ang dami ng mga partikular na primer at probe ayon sa inihandang konsentrasyon at ang inirerekomendang panghuling konsentrasyon, mangyaring.
1*: Pumili ng angkop na panghuling konsentrasyon ng ROX Reference Dye ayon sa iba't ibang quantitative PCR instruments.Ang pinakamainam na konsentrasyon ng ROX Reference Dye ng mga karaniwang quantitative PCR instruments ay ipinapakita sa sumusunod na talahanayan:
| Dami ng mga instrumento ng PCR | Panghuling konsentrasyon ng ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Unang Hakbang,atbp. | 1× (halimbawa, magdagdag ng 1μl 20×ROX Reference Dye sa 20 μL reaction system) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P at Mx4000, atbp. | 0.5× (halimbawa, magdagdag ng 0.5μl 20×ROX Reference Dye sa 20 μL reaction system) |
| Roche PCR instrument, Bio-Rad PCR instrument, Eppendorf quantitative PCR instrument, atbp. | Nang walang ROX Reference Dye |
Imbakan at buhay ng istante
Ang kit ay dapat na nakaimbak sa -20 ± 5 ℃.Dapat itong itago kaagad sa -20 ℃ thermostatic refrigerator.Ang panahon ng bisa ay 2 taon kung ito ay nakaimbak sa angkop na kondisyon.
